А.С. Васильев «Фармакологические эффекты экстрактов экдистероидсодержащих растений в условиях повышенной вязкости крови». 5.

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ
«НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ФАРМАКОЛОГИИ»
СИБИРСКОГО ОТДЕЛЕНИЯ
РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ МЕДИЦИНСКИХ НАУК

Диссертация
на соискание ученой степени

Автор:

ВАСИЛЬЕВ АЛЕКСАНДР СЕРГЕЕВИЧ

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ ЭКСТРАКТОВ
ЭКДИСТЕРОИДСОДЕРЖАЩИХ РАСТЕНИЙ
В УСЛОВИЯХ МОДЕЛЕЙ
СИНДРОМА ПОВЫШЕННОЙ ВЯЗКОСТИ КРОВИ

Часть 5.

ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ
РЕЗУЛЬТАТОВ

Гемореологические нарушения, объединяемые под термином синдром по­вышенной вязкости крови (СПВК) [Dintenfass L., 1971; Левтов В.А. и др., 1982], являются важным элементом патогенеза сердечно-сосудистых расстройств, эн­докринных заболеваний и многих других нозологий [Радзивил Г.Г. и др., 1977; Бадалян Г.О., Тунян Ю.С., 1982; Бадалян Г.О., Тунян Ю.С., 1982а; Левтов В.А. и др., 1982; Галенок В.А. и др., 1982; Тунян Ю.С., Акопов С.Э., 1983; Покалев Г.М., 1984; Ганнушкина И.В., Лебедева Н.В., 1987; Танашян М.М., 1988; Cicco G., Pir- relli A., 1999; Forconi S. et al., 1999; Kameneva M.V. et al., 1999; Lip G.Y. et al., 2001; Turczynski B. et al, 2002; Szapary L. et al., 2004; Velcheva I. et al., 2004; Cec- chi E. et al., 2006; Momtselidze N. et al., 2006; Velcheva I. et al., 2006; Velcheva I. et al., 2006a; Aono Y. et al., 2007; Caimi G. et al., 2007; Tzoulaki I. et al., 2007; Cecchi E. et al., 2008; Lee B.K. et al., 2008; Velcheva I. et al., 2008; Velcheva I., Nikolova G., 2008; Zorio E. et al., 2008; Cecchi E. et al., 2009]. СПВК формируется в результате изменения макрореологических (повышение вязкости плазмы и гематокрита) и микрореологических параметров (усиление агрегации и снижение деформируемо­сти эритроцитов) параметров [Левтов В.А. и др., 1982; Габриэлян Э.С., Акопов С.Э., 1985; Селезнев С.А., 1985; Cicco G., Pirrelli А., 1999]. Изменение интеграль­ного гемореологического показателя – вязкости цельной крови – оказывает влия­ние на общее периферическое сосудистое сопротивление, минутный объем кро­вообращения, и как следствие, на величину системного транспорта кислорода [Левтов В.А. и др., 1982; Chmiel H., 1979; Stuart J., Nash G.B., 1990; Gaehtgens P., 1995]. Нарушения реологических свойств крови приводят к расстройствам в сис­теме микроциркуляции и, в конечном итоге, к затруднению оксигенации тканей [Селезнев С.А. и др., 1976; Селезнев С.А. и др., 1985; Левтов В.А. и др., 1982; Ка­ро К. и др., 1981; Chmiel H., 1979; Ajmani R., 1997; Cecchi E. et al., 2006; Velcheva I. et al., 2008]. Кислородтранспортная функция крови в значительной степени за­висит от ее вязкости [Фирсов Н.Н., 2002; Stoltz J.F., Donner M., 1991]. В микро- циркуляторном русле, когда диаметр капилляров сопоставим или меньше диамет­ра эритроцитов, снижение способности красных клеток крови к деформируемости приводит к замедлению локального кровотока, гипоксии тканей и нарушению ра­ботоспособности органов [Савенков М.П., 1988].

За последние годы произошло изменение взглядов на причины нарушения кровообращения на уровне микроциркуляции. Доказано непосредственное уча­стие реологических механизмов в активации плазменных коагуляционных про­цессов, способствующих фибрино- и тромбообразованию, приводящих впослед­ствии к механической окклюзии сосудов [Люсов В.А., Савенков М.П., 1988; Са­венков М.П., 1988; Ajmani R., 1997; Cecchi Е. et al., 2006].

Среди факторов, определяющих патофизиологическую основу болезни, рас­стройства реологии крови занимают одно из первых мест при инфаркте миокарда [Александрова Н.П., Петухов Е.Б., 1979; Бадалян Г.О., Тунян Ю.С., 1982; Грицюк А.И., Ангелуца П.А., 1987; Гусев Е.И. и др., 1990; Атрощенко Е.С., 1991; Caimi G. et al., 2007; Zorio E. et al., 2008; Cecchi E. et al., 2008], ишемии головного мозга [Акопов С.Э., 1982; Агеева Т.С. и др., 1994; Горбачева Ф.Е. и др., 1994; Танашян М.М., 1991; Forconi S. et al., 1999; Kameneva M.V. et al., 1999; Velcheva I. et al., 2008; Velcheva I., Nikolova G. 2008], артериальной гипертензии [Ганнушкина И.В. и др., 1980; Лебедева Н.В., Ибрагимова Л.Н., 1987; Люсов В.А. и др., 1986; Cicco G., Pirrelli А., 1999; Lip G.Y. et al., 2001]. Кроме того, гемореологические наруше­ния наблюдаются при сахарном диабете [Галенок В.А. и др., 1982; Momtselidze N. et al., 2006; Cicco G. et al., 2011], опухолевом росте [Tempelhoff G.-F. et al., 2002], инфекционных заболеваниях [Todd J.C. 3rd, Mollitt D.L., 1994; Alt E. et al., 2004; Wang K. et al., 2003; Sulaberidze G.T. et al., 2005; Meiselman H.J., Baskurt O.K., 2006;„Dadgostar H. et al., 2006], стрессе [Steptoe A. et al., 2003; Rintamaki H., 2007], являясь одним из элементов патогенеза этих состояний значительно усугубляют течение основного заболевания.

В настоящее время актуальным является использование лекарственных средств, способных предотвращать или значительно уменьшать выраженность гемореологических нарушений при различных заболеваниях, сопровождающихся синдромом повышенной вязкости крови [Левтов В.А. и др., 1982; Селезнев С.А. и др., 1985].

Корригирующая терапия гемореологических осложнений должна быть мно­гокомпонентной и направленной на различные звенья патологического процесса, приводящего к повышению вязкости крови, а также учитывать особенности влия­ния гемореологических параметров на вязкодинамические свойства крови в зави­симости от уровня воздействия. Так, на уровне крупных сосудов основным на­правлением воздействия должно быть устранение гиперфибриногенемии, восста­новление оптимального соотношения белковых фракций крови и нормализация гематокрита [Левтов В.А. и др., 1982; Муравьев A.B., Чопоров C.B., 2009]. В мелких сосудах и капиллярах наибольшее значение в процессе микроциркуляции имеет деформируемость эритроцитов и действие лекарственных средств должно быть направлено именно на нормализацию этого параметра, путем восстановле­ния липидного состава мембран красных клеток и снижения процессов липопе- роксидации в них. Реологические свойства крови являются посредником между двумя физиологическими системами: гемодинамикой и гемокоагуляцией. В связи с этим, изменения реологических свойств крови нередко являются именно тем звеном патогенеза, которое реализует клинические проявления внутрисосудистых нарушений кровотока [Муравьев A.B., Чопоров C.B., 2009]. Как следствие, кли­ническая гемореология связана со многими аспектами патогенеза, симптоматики, диагностики, профилактических и терапевтических воздействий в отношении широкого спектра заболеваний [Dintenfass L., 1971; Левтов В.А. и др., 1982; Ройт- ман Е.В., 2001; Муравьев A.B., Чопоров C.B., 2009]. Конечной целью гемореоло- гии является изучение роли реологических нарушений крови в прогрессировании различных заболеваний и разработка патогенетически обоснованных методов те­рапевтического воздействия.

Закономерным начальным этапом в исследовании новой группы соединений является скрининг. Для отбора наиболее активных экстрактов экдистероидсодер- жащих растений использована модель СПВК in vitro [Плотников М.Б. и др., 1996]. Модель СПВК in vitro характеризуется повышением вязкости крови, агрегации эритроцитов и снижением деформируемости эритроцитов, что делает ее вполне пригодной для отбора перспективных гемореологических средств. Используемая нами модель СПВК in vitro позволяет исследовать влияние препаратов на микро­реологические свойства крови: агрегацию и деформируемость эритроцитов с од­новременной оценкой вклада этих параметров в интегральный гемореологический показатель – вязкость цельной крови. Модель СПВК in vitro не исключает воз­можности исследовать молекулярные механизмы функционального состояния мембран эритроцитов: активность ионных каналов и состояние мобильной части фосфолипидного бислоя (микровязкость мембран).

В наших исследованиях инкубация образцов крови в течение 60 мин при 43,5°С приводила к значительному усилению агрегации эритроцитов, снижению деформируемости красных клеток и повышению вязкости крови во всем иссле­дуемом диапазоне скоростей сдвига (3-300 с”¹).

Внесение в пробы крови EGb 761 и исследуемых экстрактов левзеи сафлоро- видной (ЭЛС-25, ЭЛС-40, ЭЛС-70) приводило к ограничению роста вязкости кро­ви, агрегации эритроцитов и препятствовало снижению деформируемости эрит­роцитов. Наибольшую гемореологическую активность в условиях in vitro проявил ЭЛС-40. По влиянию на процессы эритроцитарной агрегации ЭЛС-40 превосхо­дит препарат сравнения, что выражается в достоверном увеличении полупериода агрегации эритроцитов в сравнении с контролем и EGb 761.

Внесение в пробы крови исследуемых экстрактов лихниса хальцедонского (ЭЛХ-40 и ЭЛХ-70) приводило к ограничению роста вязкости крови, агрегации эритроцитов и препятствовало снижению деформируемости эритроцитов. ЭЛХ-40 обладает более выраженными гемореологическими свойствами и не уступает EGb 761 по способности ограничивать патологический сдвиг вязкости крови, эритро­цитарной агрегации и улучшать деформируемость эритроцитов. По влиянию на деформируемость эритроцитов на скорости сдвига 360 с”¹ ЭЛХ-40 достоверно превосходит препарат сравнения.

На модели СПВК in vitro исследуемые экстракты серпухи венценосной (ЭСВ-25, ЭСВ-40, ЭСВ-70) ограничивали рост вязкости крови, агрегации эритро­цитов и препятствовали снижению деформируемости эритроцитов. В условиях in vitro, наиболее выраженную гемореологическую активность проявил ЭСВ-40. Ге- мореологическая активность ЭСВ-40 была сопоставима с действием препарата сравнения – EGb 761.

Анализируя полученные результаты можно констатировать, что среди всех 8- ми исследуемых экдистероидсодержащих препаратов наибольшую гемореологическую активность в условиях in vitro проявили экстракты, приготовленные с ис­пользование в качестве экстрагента 40% этанола (ЭЛС-40, ЭЛХ-40 и ЭСВ-40). Наибольшей гемореологической активностью по степени воздействия на иследуемые параметры в условиях модели СПВК in vitro обладает ЭЛС-40, затем сле­дуют ЭЛХ-40 и ЭСВ-40.

Вполне очевидно, что столь существенная разница в активности исследуе­мых экстрактов экдистероидсодержащих растений приготовленных с использова­нием этанола различных концентраций определяется характером экстрагируемых веществ. По всей видимости, 40%) этанол обеспечивает наиболее оптимальное экстрагирование действующих начал, которые и обуславливают наиболее выра­женную гемореологическую активность ЭЛС-40, ЭЛХ-40 и ЭСВ-40. 40% этанол относится к экстрагентам, позволяющим извлекать вещества, обладающие гидро­фильными и липофильными свойствами, поэтому в конечных экстрактах экдисте­роидсодержащих растений могут присутствовать соединения различной химиче­ской природы и различной полярности: экдистероиды [Маматханов А.У. и др., 1980; Балтаев У.А., Абубакиров Н.К., 1987; Girault J.-P. et al., 1988; Pis J. et al., 1994; Лафон P., 1998; Golbraikh A. et al., 2000], флавоноиды, тритерпеновые сапо­нины» [Вересковский В.В., Чекалинская И.И., 1980; Opletal L. et al., 1997; Skiba A., Weglard Z., 1999; Miliauskas G. et al., 2005], сапонины, кумарины, алкалоиды [Рас­тительные ресурсы СССР, 1993; Головко Т.К. и др., 1996], органические кислоты, полисахариды, витамины [Баргман Л.И. и др., 1966; Вересковский В.В, Чекалин­ская И.И., 1977; Вересковский В.В., Чекалинская И.И., 1980]. На наш взгляд, яв­лялось целесообразным провести последовательное фракционирование наиболее активных экстрактов экдистероидсодержащих растений с целью выделения дей­ствующих веществ различной полярности и дальнейшего исследования их гемо­реологической активности в условиях in vitro. Данная стратегия позволит опреде­лить вклад различных групп биологически активных веществ в гемореологиче- скую активность цельных экстрактов экдистероидсодержащих растений.

На модели СПВК in vitro водная фракция ЭЛС-40 эффективно снижала вяз­кость крови и улучшала деформируемость эритроцитов, не влияя на их агрега­цию; бутанольная фракция ослабляла агрегацию и увеличивала деформируемость эритроцитов; этилацетатная фракция повышала индекс деформируемости эритро­цитов и не оказывала влияния на вязкость крови и агрегацию эритроцитов. Цель­ный экстракт оказывал влияние на все исследуемые гемореологические парамет­ры, эффективно снижая вязкость крови, агрегацию эритроцитов и улучшая де­формируемость красных клеток на модели СПВК in vitro. Схожие результаты по­лучены и в отношении гемореологической активности in vitro различных фракций ЭЛХ-40. Гемореологическую активность в условиях in vitro проявила и выделен­ная из ЭЛХ-40 суммарная фракция экдистероидов, которая эффективно снижала вязкость крови, агрегацию эритроцитов и улучшал их деформируемость. Таким образом, гемореологическая активность проявляется у тех фракций (водная, бута­нольная), которые в большем количестве содержат экдистероиды, флавоноиды и тритерпеновые сапонины. Этилацетатная фракция, содержащая в основном алка­лоиды, обладает сравнительно низкой гемореологической активностью. На моде­ли СПВК in vitro наиболее показательные результаты получены при исследовании гемореологической активности высокоочищеной суммарной фракции экдисте­роидов (СФЭ) и суммарной фракции флавоноидов (СФФ), выделенных из ЭСВ- 40. Сумма экдистероидов в условиях in vitro оказывала влияние только на дефор­мируемость эритроцитов, а сумма флавоноидов – на агрегацию эритроцитов и лишь цельный экстракт ЭСВ-40 эффективно воздействовал на все исследуемые гемореологические параметры: снижал вязкость крови, агрегацию эритроцитов и улучшал деформируемость красных клеток крови. Исходя из полученных данных, можно сделать вывод, что экдистероиды, входящие в состав исследуемых экс­трактов, являются основными действующими веществами, а флавоноиды, тритер­пеновые сапонины, алкалоиды, антоцианы и кумарины являются модификатора­ми гемореологического эффекта.

Таким образом, при разработке гемореологических средств на основе экс­трактов экдистероидсодержащих растений предпочтение отдается использованию суммарных экстракционных препаратов в сравнении с отдельными фракциями и высокоочищенными суммами биологически активных веществ, выделенных из этих же экстрактов. Обнаружение гемореологических свойств у экстрактов экди­стероидсодержащих растений в условиях in vitro послужило основанием для бо­лее углубленного изучения наиболее активных из них в условиях in vivo, на моде­лях патологических состояний, сопровождающихся СПВК.

Изучение гемореологической активности препаратов в условиях in vivo под­разумевает оценку вклада каждого гемореологического параметра в интегральный показатель – вязкость цельной крови. На вязкость крови оказывают влияние как макрореологические показатели (гематокрит, вязкость плазмы), так и микрорео­логические параметры (агрегация и деформируемость эритроцитов). Комбинации этих параметров формируют различные варианты СПВК [Селезнев С.А. и др., 1985].

Гемореологические нарушения являются важной составной частью в патоге­незе и имеют большое значение в прогрессировании таких заболеваний как ише- мичебкая болезнь сердца (ИБС) и инфаркт миокарда [Бадалян Т.О., Тунян Ю.С., 1982; Грицюк А.И., Ангелуца П.А., 1987; Гусев Е.И. и др., 2002; Zorio Е. et al, 2008; Cecchi Е. et al., 2008; Cecchi E. et al., 2009], разнообразные нарушения моз­гового кровообращения и инсульт [Акопов С.Э., 1982; Танашян М.М., 1991; Гор­бачева Ф.Е. и др., 1994; Szapary L. et al., 2004; Velcheva I. et al., 2004; Velcheva I. et al., 2006], артериальная гипертензия и гипертоническая болезнь [Ганнушкина И.В. и др., 1980; Люсов В.А. и др., 1986; Лебедева Н.В., Ибрагимова Л.Н., 1987; Cicco G., Pirrelli А., 1999; Lip G.Y. et al., 2001], сахарный диабет [Боднар П.Н. и др., 1984; Галенок В.А. и др., 1982; Хараш Л.М., Лапотников В.А., 1982; Watala С. et al, 1992].

Расстройства реологии крови при нарушениях мозгового кровообращения являются одним из самых существенных механизмов формирования недостаточ­ности кровоснабжения мозга как на ранних этапах развития заболевания [Тана- шян М.М., 1991; Горбачева Ф.Е. и др., 1994; Velcheva I. et al., 2006; Aono Y. et al.,

2007; Velcheva I. et al., 2008], так и при продолжительном хроническом течении процесса [Szapary L. et al., 2004]. Формирование СПВК при нарушениях цереб­рального кровообращения происходит при повышенных значениях гематокрита [Мчедлишвили Г.И., 1982]. Поскольку головной мозг относится к органам, нуж­дающимся в повышенном обеспечении кислородом, содержание эритроцитов в мозговой сосудистой сети сравнительно велико [Гурвич A.M., Мутускина Е.А., 1984], что является причиной увеличения локальной вязкости крови. В связи с этим, структурно-функциональное состояние эритроцитов имеет особое значение в формировании нарушений реологии крови при цереброваскулярных расстрой­ствах [Мхеян Э.Е. и др., 1981]. Повышение вязкости крови, агрегации эритроци­тов, концентрации фибриногена, гематокрита и снижение деформируемости крас­ных клеток являются факторами риска мозгового инсульта [Высоцкая В.Г. и др., 1982; Виничук И.С., 1990; Cecchi Е. et al., 2006; Aono Y. et al., 2007; Velcheva I. et al., 2008], причем между степенью тяжести цереброваскулярных расстройств и выраженностью СПВК существует тесная связь [Габриэлян Э.С., Акопов С.Э.; 1985; Канарейкин К.Ф., Манвелов Л.С., 1994]. Выявлено, что между глубиной ге­мореологических нарушений и состоянием когнитивных функций у пациентов с ишемическими повреждениями головного мозга также наблюдается высокий уро­вень взаимосвязи [Velcheva I., Nikolova G., 2008].

В наших исследованиях воспроизведенная модель ишемии головного мозга сопровождалась значительным повышением вязкости крови во всем исследуемом диапазоне скоростей сдвига, ростом агрегации эритроцитов, увеличением концен­трации фибриногена и снижением деформируемости эритроцитов. Проведенный корреляционный анализ показал наличие высокой степени отрицательной взаимо­связи между вязкостью крови и деформируемостью эритроцитов в области сред­них скоростей сдвига (100 с”¹) (г= -0,79; р<0,05) и вязкостью крови и полуперио­дом агрегации эритроцитов (г= -0,66; р<0,05). Это свидетельствует о значитель­ном вкладе микрореологических свойств крови (агрегации и деформируемости.

Кроме того, используемая модель ишемии головного мозга основана на перевязке сонных артерий, что может приводить к нарушению геометрии потока и возник­новению очагов турбулентности, которые могут оказывать повреждающее дейст­вие в отношении эритроцитов [Левтов В.А., 1982; Ионова В.Г., Суслина З.А., 2002], Несмотря на то, что показатель гематокрита в условиях воспроизведенной нами модели ишемии головного мозга находился в пределах физиологических значений, существенное увеличение агрегации и уменьшение деформируемости эритроцитов в сочетании с высокими значениями фибриногена приводило к уве­личению вязкости крови и, следовательно, снижению показателя доставки кисло- родам к тканям.

Курсовое применение ЭЛС у крыс с ишемией головного мозга приводило к снижению вязкости плазмы, концентрации фибриногена и улучшению деформи­руемости эритроцитов. Положительное воздействие курсового применения ЭЛС на гемореологические параметры крыс с ишемией головного мозга способствова­ло значительному снижению вязкости крови во всем исследуемом диапазоне ско­ростей сдвига (3-300 с”¹). Корреляционный анализ показал высокую степень по­ложительной взаимосвязи между вязкостью плазмы и концентрацией фибриноге­на (г=0,76; р<0,05) и отрицательной взаимосвязи между вязкостью плазмы и по­лупериодом агрегации эритроцитов (г= -0,89; р<0,05) у крыс получавших ЭЛС. Применение ЭЛС у крыс с ишемией головного мозга способствовало снижению вязкости плазмы и концентрации фибриногена, однако это не оказывало влияния на полупериод агрегации эритроцитов. Вероятно, процесс агрегации эритроцитов в данном случае в большей степени зависел от содержания других макромолеку- лярных белков плазмы, на концентрацию которых ЭЛС не оказывал воздействия. Интересная положительная взаимосвязь выявлена между гематокритом и дефор­мируемостью эритроцитов на скорости сдвига 180 с”¹. Это может быть объяснено активирующим влиянием экдистероидсодержащего препарата ЭЛС на эритропоэз [Сыров В.Н., 1994; Сыров В.Н. и др., 2004]. В результате курсового применения ЭЛС у крыс с ишемией головного мозга происходит пополнение кровеносного русла молодыми эритроцитами, обладающими большей способностью к дефор­мируемости [Мельников A.A., Викулов А.Д., 2008]. Влияние ЭЛС на деформи­руемость эритроцитов является важным положительным свойством исследуемого экстракта, так как именно улучшение деформируемости эритроцитов, особенно в области высоких скоростей сдвига определяет интенсивность кровообращения на уровне микроциркуляторного русла и кислородтранспортную функцию крови [Муравьев A.B., Чопоров C.B., 2009]. Курсовое применение ЭЛС у крыс с ишеми­ей головного мозга способствовало снижению вязкости крови с одновременным улучшением деформируемости эритроцитов, что в конечном итоге приводит к увеличению показателя доставки кислорода к тканям во всем исследуемом диапа­зоне скоростей сдвига (3-300 с”¹).

Улучшение реологических свойств крови рассматривается как одна из пер­спективных стратегий при лечении ишемических повреждений мозга [Ehrly A.M., 1990].

В наших исследованиях, применение ЭЛС у крыс с ишемией головного мозга приводило к улучшению параметров ЭЭГ к 5-м суткам эксперимента, что выра­жалось в статистически значимом усилении мощности 5-, 0-, а- и ß-ритма в левом и правом полушариях, а также суммарной мощности теменной коры обоих полу­шарий. В условиях ишемии головного мозга у крыс ЭЛС способствует повыше­нию в равной степени мощностей всех ЭЭГ-спектров, что свидетельствует о тони­зирующем эффекте исследуемого препарата [Воронина Т.А. и др., 1987].

Курсовое применение ЭЛХ у крыс с ишемией головного мозга способствова­ло снижению вязкости плазмы, концентрации фибриногена, агрегации эритроци­тов и улучшению деформируемости эритроцитов. В группе животных с ишемией головного мозга, получавших ЭЛХ, наблюдаемое снижение вязкости плазмы и концентрации фибриногена приводит к закономерному ослаблению агрегацион- ной активности эритроцитов. В свою очередь, снижение агрегации и улучшение деформируемости эритроцитов способствует снижению вязкости цельной крови во всем исследуемом диапазоне скоростей сдвига (3-300 с”¹). Корреляционный анализ показал наличие отрицательной взаимосвязи высокой степени между вяз­костью крови и деформируемостью эритроцитов в диапазоне средних скоростей сдвига (180 с”¹) (г= -0,82; р<0,05). Улучшение микрореологических параметров под влиянием ЭЛХ является одним из главных факторов, вносящих вклад в про­цесс ослабления выраженности СПВК при ишемии головного мозга у крыс. В опытной группе показатель гематокрита достоверно не отличался от значений в контроле, однако за счет положительного влияния на микрореологические (агре­гация и деформируемость эритроцитов) и макрореологические (вязкость плазмы и фибриноген) свойства происходило значительное снижение вязкости цельной крови и соответственно улучшение показателя, характеризующего доставку ки­слорода к тканям во всем исследуемом диапазоне скоростей сдвига (3-300 с”¹).

На 5-е сутки после применения ЭЛХ происходило достоверное восстановле­ние мощностей отдельных ЭЭГ-спектров и суммарной электрической активности как в правом, так и в левом полушарии, что свидетельствует о проявлении иссле­дуемым экстрактом органопротективного действия в условиях модели ишемии головного мозга.

У крыс с ишемией головного мозга, получавших ЭСВ происходило умерен­ное уменьшение агрегации и увеличение деформируемости эритроцитов, однако это не приводило к достоверному снижению интегрального гемореологического показателя – вязкости цельной крови. В то же время значения вязкости крови в опытной группе не отличалась от таковых у интактных животных. ЭСВ не оказы­вает достоверного влияния на макрореологические параметры (вязкость плазмы и концентрация фибриногена), и вероятно, способности исследуемого экстракта улучшать микрореологические свойства крови было недостаточно для улучшения вязкости крови во всем исследуемом диапазоне скоростей сдвига.

Церебропротекторная активность ЭЛС и ЭЛХ может быть результатом их прямого воздействия на функциональную активность коры головного мозга и опосредованного, в частности, за счет улучшения реологических свойств крови, от которых в свою очередь зависят процессы микроциркуляции и оксигенации. Прямое действие ЭЛС и ЭЛХ на электрофизиологическую активность головного мозга, в определенной степени подтверждается характером влияния исследуемых экстрактов на параметры ЭЭГ. ЭЛС и ЭЛХ повышают мощности отдельных диа­пазонов и сумарную мощность ЭЭГ-спектров в обоих полушариях, однако ампли­туда доминирующего пика значимо не изменяется. В данном случае, можно гово­рить о наличии у ЭЛС и ЭЛХ тонизирующей активности и отсутствии ноотропно- го действия [Воронина Т.А. и др., 1987]. Тонизирующий эффект ЭЛС и ЭЛХ в от­ношении ЦНС обеспечивается в основном наличием в исследуемых экстрактах экдистероидов [Ахрем А.А., Ковганко Н.В., 1989; Сыров В.Н., 1994; Володин В.В. и др., 2006]. Поскольку, улучшение гемореологического статуса под действием ЭЭСР в условиях модели ишемии головного мозга происходит в основном за счет влияния исследуемых экстрактов на микрореологические параметры (деформи­руемость эритроцитов) возможно предполагать цитопротекторный эффект и в от­ношении других клеток организма, в частности – нейронов [Плотников М.Б. и др., 2005]. Цитопротекторный эффект исследуемых экстрактов в отношении нейронов может реализовываться за счет наличия антиокислительной активности у экди­стероидов и флавоноидов, входящих в состав исследуемых экстрактов [Сыров В.Н. и др., 1986; Middleton Е. et al., 2000; Bathori М. et al., 2004].

Таким образом, в условиях модели ишемии головного мозга ЭЭСР обладают гемореологической активностью и ослабляют выраженность СПВК за счет воз­действия как на микрореологические, так и на макрореологические параметры. Наибольшую гемореологическую активность проявил ЭЛХ, который достоверно воздействовал на все исследуемые гемореологические параметры: вязкость крови и плазмы, агрегацию и деформируемость эритроцитов, концентрацию фибриноге­на. ЭЛС статистически достоверно снижал вязкость крови, вязкость плазмы, кон­центрацию фибриногена и улучшал деформируемость эритроцитов, не влияя дос­товерно на полупериод агрегации эритроцитов. На модели ишемии головного мозга ЭСВ достоверно воздействовал только на микрореологические параметры: агрегацию и деформируемость эритроцитов. По нашему мнению, в условиях мо­дели ишемии головного мозга именно гемореологические свойства ЭЭСР лежат в основе их церебропротекторной активности, которая проявляется улучшением показателей ЭЭГ.

При ИБС и инфаркте миокарда наблюдаются существенные изменения гемо- реологического статуса, причем при инфаркте миокарда нарушения более выра­жены [Казаков Ю.М., 1981; Покалев Г.М. и др., 1983; Покалев Г.М., 1984; Люсов В.А., Савенков М.П., 1988; Cecchi Е. et al., 2008]. При инфаркте миокарда значи­тельно повышена вязкость крови [Соловьев Г.М., 1977], вязкость плазмы [Габриэлян Э.С., Акопов С.Э., 1985], концентрация фибриногена и его дериватов [Катю­хин Л.Н. и др., 1999; Zorio Е. et al., 2008], агрегация эритроцитов [Покалев Г.М. и др., 1977; Катюхин Л.Н., 2001; Zorio Е. et al., 2008] и снижена деформируемость красных клеток [Бадалян Г.О., Епископян Н.Г., 1983; Катюхин Л.Н., 2001]. При этом существует тесная корреляционная связь между степенью сердечной недос­таточности и повышением вязкости крови [Бадалян Г.О., Тунян Ю.С., 1982; Ку- ницин В.Г., Хавин П.П., 1983; Гусев Е.И. и др., 1990]. Существуют сведения, что при значительных сдвигах вязкости крови в сторону повышения чаще регистри­руются осложнения (кардиогенный шок, тромбоэмболия, левожелудочковая не­достаточность) [Соловьев Г.М., 1977; Савенков М.П., 1988; Cecchi Е. et al., 2008; Zorio Е. et al., 2008]. В работе [Cecchi Е. et al., 2009] указывается на высокую сте­пень взаимосвязи между вязкостью крови и размерами зон некроза у пациентов с острым инфарктом миокарда. Установлено, что агрегационная активность эрит­роцитов усиливается у пациентов в ряду: стабильная стенокардия – нестабильная стенокардия – острый инфаркт миокарда [Lee В.К. et al., 2008]. Повышение вязко­сти плазмы при инфаркте миокарда обусловлено, в основном увеличением кон­центрации фибриногена и других грубодисперсных белков. Известно, что при инфаркте миокарда нарушается целостность мембран эндотелиальных клеток за счет усиления перекисного окисления липидов [Габриэлян Э.С., Акопов С.Э.,1985] и выброса в кровь вазоактивных компонентов [Селезнев С.А. и др., 1985], что сопровождается повышением проницаемости капилляров и риском кровоте­чений. В результате возникает необходимость активации системы гемостаза за счет плазменных факторов, в том числе и за счет повышения синтеза фибриноге­на. Увеличение агрегационной активности эритроцитов и снижение их деформи­руемости у больных с инфарктом миокарда наблюдаются уже на 1-е сутки и про­грессируют вплоть до 10-14-го дня заболевания [Катюхин Л.Н. и др., 1999] и также не обходятся без участия в этих процессах фибриногена. На поверхности мембран эритроцитов имеются комплементарные участки связывания с фибрино­геном. При взаимодействии с этими рецепторами фибриноген повышает количе­ство устойчивых эритроцитарных агрегатов в кровеносном русле, что приводит к нарушению ориентации клеточных элементов крови в потоке и расстройствам кровообращения в артериолах. Кроме того, адсорбция фибриногена и крупномо­лекулярных белков на мембранах эритроцитов снижает поверхностный отрица­тельный заряд, что приводит к значительным нарушениям полярного равновесия между эритроцитами, а также между эритроцитами и эндотелием [Казаков Ю.М., 1981]. Нельзя исключить роль ионного дисбаланса, возникающего в результате изменения пассивного трансмембранного переноса ионов (нарушение целостно­сти мембран, изменение их фосфолипидного состава, вследствие ослабления ан- тиоксидантной защиты эритроцитов в системе глютатиона) [Ланкин В.З. и др., 2000] и активного транспорта (снижение активности АТФ-аз эритроцитов по при­чине общего дефицита макроэргов) [Бадалян Г.О., Тунян Ю.С., 1982; Бадалян Г.О., Епископян Н.Г., 1983; Габриэлян Э.С., Акопов С.Э., 1985] в повышении аг­регации и снижении деформируемости красных клеток. У пациентов с кардиоген- ным шоком наблюдаются наиболее выраженные нарушения деформируемости эритроцитов в сравнении с показателями у больных инфарктом миокарда и ише- мической болезнью сердца. Установлено, что снижение деформируемости эрит­роцитов у больных с кардиогенным шоком происходит за счет снижения осмоти­ческой резистентности красных клеток и резкой дегидратации гемоглобина [Ка­тюхин Л.Н. и др., 1999]. Эти данные уточняют наши представления о патогенезе патологических состояний, сопровождающихся острыми нарушениями коронар­ного кровообращения и актуализируют роль в этих процессах гемореологических расстройств. Повышение вязкости крови и изменение других гемореологических параметров приводит к повышению общего периферического сосудистого сопро­тивления и нагрузки на миокард, что приводит к развитию осложнений и вторич­ной сердечной недостаточности [Соловьев Г.М., 1977; Савенков М.П., 1888]. Это совпадает с данными, что степень застойной сердечной недостаточности коррели­рует с повышением вязкости крови, снижением деформируемости и усилением агрегации эритроцитов, увеличением концентрации фибриногена [Габриэлян Э.С., Акопов С.Э., 1985].

В условиях воспроизведенной нами модели инфаркта миокарда наблюдался комплекс выраженных гемореологических нарушений: повышение вязкости кро­ви и плазмы, гематокрита, концентрации фибриногена, агрегации эритроцитов и снижение деформируемости красных клеток. Корреляционный анализ показал на­личие отрицательной взаимосвязи высокой степени между полупериодом агрега­ции и гематокритом (г= -0,84; р<0,05), полупериодом агрегации и концентрацией фибриногена (г= -0,79; р<0,05); средней степени отрицательной взаимосвязи меж­ду вязкостью крови и деформируемостью эритроцитов в области высоких скоро­стей сдвига (890 с”¹) (г= -0,66; р<0,05). Интенсивность процесса агрегации эритро­цитов напрямую зависит от количества форменных элементов, так как при повы­шении количества эритроцитов вероятность их контакта повышается [Левтов В.А. и др., 1982; Селезнев С.А. и др., 1985]. Взаимосвязь агрегации эритроцитов с кон­центрацией фибриногена вполне очевидна, поскольку фибриноген напрямую уча­ствует в процессе агрегации по мостиковому механизму [Левтов В.А. и др., 1982; Муравьев A.B., Чопоров C.B., 2009]. Имеются данные, доказывающие прямопропорциональную зависимость между концентрацией фибриногена и размером эритроцитарных агрегатов [Левтов В.А. и др., 1982; Габриэлян Э.С., Акопов С.Э., 1985; Муравьев A.B., Чопоров C.B., 2009]. Таким образом, формирование СПВК при инфаркте миокарда происходит за счет нарушений микрореологических ха­рактеристик крови (агрегации и деформируемости эритроцитов). Агрегация и де­формируемость эритроцитов относятся к реологическим параметрам, определяю­щим интенсивность кровообращения во всех отделах сосудистого русла и эффек­тивность газообмена на уровне микроциркуляции. Это подтверждается значи­тельным снижением показателя доставки кислорода к тканям во всем исследуе­мом диапазоне скоростей сдвига у крыс с инфарктом миокарда. Изменения гемо­» миокарда касались как макрореологических параметров – возрастание гематокри­та и фибриногена, так и показателей клеточной реологии – уменьшение индекса деформируемости и полупериода агрегации эритроцитов. Данный вариант СПВК, характерен для нарушений коронарного кровообращения, особенно острых его формДБадалян Г.О., Тунян Ю.С., 1982; Катюхин J1.H. и др., 1999; Константинова Е.Э., 2004].

В наших исследованиях, воспроизведенный инфаркт миокарда сопровождал­ся выраженными изменениями показателей ЭКГ. Наблюдалось уменьшение ам­плитуды зубца Т, что указывает на наличие зоны ишемии. Кроме этого, было от­мечено резкое снижение амплитуды зубца R и появление патологического зубца Q и измененного зубца Т. Отсутствие комплекса QRS и формирование комплекса QT отражают формирование в сердечной мышце обширной зоны некроза. Выяв­ленные сдвиги параметров ЭКГ свидетельствуют о развитии острой стадии ин- фаркха миокарда [Мурашко В.В, Струтынский A.B., 2000].

Через 5 суток у крыс контрольной группы сохранялась прежняя динамика показателей ЭКГ: зубец Т уменьшился еще сильнее, чем на 1-е сутки после моде­лирования инфаркта, что указывает на сохранение зоны ишемии. Амплитуда R- зубца оставалась значительно сниженной. Присутствие патологического зубца Q, измененного зубца Т и комплекса QT подтверждается наличием в контрольной группе зоны некроза с формированием рубцовой стадии инфаркта миокарда [Му­рашко В.В, Струтынский A.B., 2000].

Курсовое применение ЭЛС у крыс с инфарктом миокарда способствовало уменьшению вязкости плазмы, концентрации фибриногена и повышению дефор­мируемости эритроцитов, что приводит к снижению вязкости крови в диапазоне высоких скоростей сдвига (100-300 с”¹). Корреляционный анализ подтвердил уча­стие как макрореологических, так и микрореологических параметров в процессе снижения интегрального гемореологического показателя – вязкости цельной кро­ви у крыс с инфарктом миокарда, леченных ЭЛС. Наблюдалась высокая степень отрицательной взаимосвязи между вязкостью крови на скорости сдвига 300 с”¹ и деформируемостью эритроцитов на скорости сдвига 890 с”¹ (г= -0,77; р<0,05). По­ложительная взаимосвязь отмечалась между гематокритом и вязкостью крови на скоростях сдвига 3-100 с”¹ (г=0,81-0,95; р<0,05), концентрацией фибриногена и вязкостью плазмы (г=0,82; р<0,05). У крыс с инфарктом миокарда, леченных ЭЛС улучшение деформируемости эритроцитов, ослабление агрегации эритроцитов, снижение концентрации фибриногена и вязкости плазмы сопровождалось высо­кими значениями гематокрита (48%), что позволило препарату снизить вязкость крови только на высоких скоростях сдвига (100-300 с”¹) и способствовало зако­номерному повышению показателя доставки кислорода к тканям так же в диапа­зоне высоких скоростей сдвига.

При курсовом введении ЭЛС крысам с инфарктом миокарда происходило уменьшение зубца и сокращения объема некроза, что говорит о способности исследуемого экстракта сдерживать развитие кардиодистрофических изменений в миокарде.

Курсовое применение ЭЛХ у крыс с инфарктом миокарда приводило к сни­жению вязкости плазмы, концентрации фибриногена, агрегации эритроцитов и улучшению деформируемости эритроцитов. Положительное воздействие ЭЛХ на макро- и микрореологические параметры закономерно приводило к снижению вязкости цельной крови в широком диапазоне скоростей сдвига 5-300 с”¹. Корре­ляционный анализ показал наличие положительной взаимосвязи высокой степени между гематокритом и вязкостью крови на низких скоростях сдвига (3-7 с”¹) (г=0,79-0,87; р<0,05) и отрицательной взаимосвязи высокой степени между полу­периодом агрегации эритроцитов и вязкостью крови на скорости сдвига 10 с”¹. В основе положительного эффекта ЭЛХ в условиях модели инфаркта миокарда ле­жит способность экстракта воздействовать на показатели, отражающие состояние

гемореологического статуса в области низких (агрегация эритроцитов, вязкость *

плазмы, концентрация фибриногена) и высоких (деформируемость эрироцитов) скоростей сдвига. Учитывая, что улучшение показателя, характеризующего дос­тавку кислорода к тканям происходило лишь в области низких скоростей сдвига (3-7 с”¹), основная роль в реализации гемореологической активности ЭЛХ при­надлежит его влиянию на агрегацию эритроцитов, концентрацию фибриногена и вязкость плазмы.

Курсовое применение ЭСВ у крыс с инфарктом миокарда способствовало до­стоверному улучшению деформируемости эритроцитов во всем исследуемом диапазоне скоростей сдвига (90-890 с”¹). Это приводило к снижению вязкости крови в диапазоне высоких скоростей сдвига, поскольку именно в этом диапазоне этот показатель преимущественно зависит от деформируемости эритроцитов [Chien S, 1977]. Это подтверждается наличием корреляционных взаимосвязей между вязкостью крови и деформирумостью эритроцитов в диапазоне высоких скоостей сдвига (г= -0,65-0,75; р<0,05). В результате того, что исследуемый пре­парат не оказывал значимого влияния на агрегацию эритроцитов, концентрацию фибриногена и другие гемореологические параметры, улучшение лишь деформи­руемости эритроцитов не приводило к достоверному улучшению показателя дос­тавки кислорода к тканям.

Кардиопротекторное действие ЭСВ проявилось после курсового введения препарата в снижении количества животных с патологическим зубцом Q, что сви­детельствует о редукции зоны некроза в миокарде.

Оценивая эффективность ЭЭСР в условиях модели инфаркта миокарда мож­но заключить, что исследуемые препараты обладают гемореологической активно­стью и ослабляют выраженность СПВК за счет воздействия как на микрореологи­ческие, так и на макрореологические параметры. На модели инфаркта миокарда ЭЛС и ЭЛХ проявили приблизительно равную активность, эффективно воздейст­вуя на все исследуемые гемореологические показатели: вязкость крови и плазмы, агрегацию и деформируемость эритроцитов, концентрацию фибриногена. Однако, ЭЛС более эффективно ограничивал зону некроза в миокарде. ЭСВ на модели инфаркта миокарда оказывал слабую гемореологическую активность, которая проявлялась лишь в повышении деформируемости эритроцитов.

При гипертонической болезни и артериальной гипертензии в формировании СПВК принимают участие повышение агрегации и снижение деформируемости эритроцитов [Габриэлян Э.С, Акопов С.Э, 1985], значительное увеличение кон­центрации фибриногена [Редчиц Е.Г. и др., 1988] и возрастание гематокрита [Ша­банов В.А., 1990]. При исследовании микроциркуляторного русла методами при­жизненной микроскопии обнаружены изменения структурно-функционального состояния капиллярного русла с признаками внутрисосудистой агрегации эритро­цитов у пациентов с гипертонической болезнью [Шабанов В.А., 1990]. Изменения микроциркуляторного русла со сдвигами реологических свойств крови могут яв­ляются основой синдрома капилляро-трофической недостаточности при артери­альной гипертензии. Гиперагрегация эритроцитов является одной из причин уве­личения вязкости крови при артериальной гипертензии [Габриэлян Э.С., Акопов С.Э., 1985; Шабанов В.А., 1990], особенно в сочетании с высокими значениями гематокрита [Шабанов В.А., 1990; Cirillo S. et al., 1992]. Другой причиной разви­тия нарушений кровообращения на уровне микроциркуляции и повышения вязко­сти крови при артериальной гипертензии является снижение способности эритро­цитов к деформируемости, обнаруживаемое как на этапе гипертонического криза, так и во внекризовом периоде [Люсов В.А. и др., 1986]. Снижение деформируемо­сти эритроцитов приводит к нарушению необходимой перфузии клеток в капил­лярном русле и снижению оксигенации тканей. Для компенсации возникшего де­фицита в системе обеспечения клеток кислородом повышается систолическое ар­териальное давление и гематокрит. При артериальной гипертензии имеет место системное повреждение клеточных мембран [Орлов С.Н. и др., 1981; Орлов С.Н. и др., 1984], затрагивающее как гладкомышечные элементы, так и клетки крови, в частности – эритроциты [Постнов Ю.В. и др., 1975; Постнов Ю.В., Орлов С.Н., 1987; Лебедева Н.В., Ибрагимова Л.Н., 1987]. Эти изменения влияют на ионную проницаемость клеточных мембран, структуру мембранных белков и липидов, а также активность многих мембранных ферментов [Орлов С.Н. и др., 1984; Лебе­дева Н.В., Ибрагимова Л.Н., 1987]. Нарушение целостности и структуры мембран эритроцитов является причиной высвобождение в кровоток факторов, обладаю­щих прокоагулянтной и антифибринолитической активностью, а также веществ, обладающих вазоактивными свойствами, что может являться одним из патогене­тических механизмов повышения артериального давления [Дроздова Г.А., 2000; Reznik L. et. al., 2003]. Исследования эритроцитарных мембран пациентов, стра­дающих гипертонической болезнью выявили значительные нарушения водно- электролитного баланса клетки [Постнов Ю.В. и др., 1975; Постнов Ю.В., Орлов С.Н., 1987]. В эритроцитах больных гипертонической болезнью наблюдается на­рушение проницаемости мембран для одно- и двухвалентных ионов за счет пас­сивного и активного транспорта [Орлов С.Н. и др., 1981; Орлов С.Н. и др., 1984]. Причинами нарушения пассивного транспорта ионов через мембрану являются: дисбаланс фосфолипидного спектра [Лебедева Н.В., Ибрагимова Л.Н., 1987; Backman L. et al., 1998], сдвиги белковой фазы эритроцитарных мембран (умень­шение полосы 3, ответственной за транспорт катионов) [Габриэлян Э.С., Акопов С.Э., 1985], нарушение активности фосфокиназ, участвующих в фосфорилирова- нии полифосфоинозитидов – класс липидов, обеспечивающих проницаемость мембран для катионов [Черницкий Е.А., Воробей A.B. 1981; Rana R.S., Hokin L.E., 1990]; активного – снижение функционирования мембранно-связанных фермен­тов [Габриэлян Э.С., Акопов С.Э., 1985]. При гипертонической болезни повышен транспорт ионов Na⁺ в клетку, в то время как выведение его нарушено в результа­те сниженной активности Na⁺-K⁺-ATO-a3bi, которая в свою очередь регулируется ионами Са⁺ [Постнов Ю.В. и др., 1977; Berridge M.J., 1993]. При артериальной гипертензии снижается также и активность Mg -Ca -АТФ-азы [Мхеян Э.Е. и др., 1981], в результате нарушается выход ионов Са²⁺ из клетки и возможно его связы­вание с белком эритроцитарного матрикса – спектрином, тем самым повышается жесткость мембран и снижается способность эритроцитов к деформируемости. Ионы Са²⁺ способны воздействовать на скорость фосфорилирования спектрина [Wallis C.J. et al.,. 1993], что может изменять поверхностный заряд эритроцитов [Габриэлян Э.С., Акопов С.Э., 1985; Петренко Ю.М., Владимирова Ю.Н., 1987; Coull В.М. et al., 1986]. Кроме того, при нарушениях обмена фосфолипидов мем­бран эритроцитов у больных гипертонической болезнью преобладают нейтраль­ные и кислые фосфолипиды, имеющие способность ингибировать активность Na⁺– К⁺-АТФ-азы и Mg²⁺-Ca²⁺-АТФ-азы [Габриэлян Э.С., Акопов С.Э., 1985; Владими­ров Ю.А., 1989]. Большое значение в возникновении мембранных нарушений при гипертонической болезни придается снижению синтеза АТФ и развитию лактаци- доза, активации процессов ПОЛ и свободно-радикальному повреждению мем­бранных фосфолипидов и белков [Габриэлян Э.С., Акопов С.Э., 1985; Сюрин A.A., Кулагин Ю.И., 1987]. В результате нарушаются вязко-эластические свойства мембран, повышается вязкость внутриклеточного содержимого и происходит усиление степени сферичности клетки. Эти изменения приводят к повышению индекса ригидности эритроцитов.

Спонтанно-гипертензивные крысы (SHR) рассматриваются как адекватная модель артериальной гипертензии [Орлов С.Н. и др., 1984] и СПВК [Плотников М.Б. и др., 1998]. Артериальное давление у крыс SHR повышено по сравнению с нормотензивными животными на 30-40% [Орлов С.Н. и др., 1981]. Характерной особенностью спонтанной генетической гипертензии у крыс является изменение функционального состояния эритроцитарных мембран [Орлов С.Н. и др., 1981; Орлов С.Н. и др., 1984; Лебедева Н.В., Ибрагимова Л.Н., 1987]. У крыс линии SHR повышена проницаемость мембраны эритроцитов для ионов Na⁺, в основном за счет увеличение пассивного транспорта [Постнов Ю.В. и др., 1975]; отмечено возрастание микровязкости мембран эритроцитов [Постнов Ю.В., Орлов С.Н., 1987]₅ что может быть обусловлено нарушением качественного и количественного состава мембранных фосфолипидов и белков [Лебедева Н.В., Ибрагимова Л.Н., 1987]. Эти изменения могут служить причиной нарушения морфо- функциональных свойств эритроцитов, которые во многом определяют реологи­ческие свойства красных клеток. У крыс линии SHR наблюдается вариант СПВК, который проявляется в повышенной вязкости крови и плазмы, увеличенной концентрации фибриногена в плазме, усиленной агрегации и сниженной деформируемости эритроцитов. СПВК у крыс SHR характеризуется снижением показателя доставки кислорода к тканям во всем исследуемом диапазоне скоростей сдвига (3-300 с”¹). У крыс линии SHR отсутствовали корреляционные взаимосвязи меж­ду гемореологическими параметрами, в отличие от крыс Вистар, которые характеризовались наличием множественных взаимосвязей: отрицательная корреляция выявлена между вязкостью крови на высоких скоростях сдвига (100-300 с”¹) и де­формируемостью эритроцитов (г= -0,856; р<0,05), полупериодом агрегации эритроцитов и гематокритом (г= -0,789; р<0,05), полупериодом агрегации эритроцитов и уровнем фибриногена в плазме крови (г= -0,937; р<0,05); отрицательная корре­ляция средней степени выявлена между вязкостью крови при низких скоростях сдвига (3-10 с”¹) с полупериодом агрегации эритроцитов (г= -0,656; р<0,05). Кро­ме этого, установлена положительная корреляция вязкости крови с концентраци­ей фибриногена в плазме (г=0,856; р<0,05) и гематокритом (г=0,726; р<0,05). От­сутствие корреляционных взаимосвязей у животных с генетически детерминиро­ванной патологией (крысы линии SUR) отражает разобщение процессов регуля­ции и согласованность элементов функциональной системы реологии крови. Оче­видно, что у крыс линии SHR наблюдается состояние дизрегуляции, при котором адаптация невозможна и ведущими становятся деструктивные процессы [Гольд- берг Е.Д. и др., 1996].

Применение ЭЛС у крыс с артериальной гипертензией (линия SHR) способ­ствовало снижению вязкости крови и плазмы, агрегации эритроцитов, концентра­ции фибриногена и улучшению деформируемости красных клеток. Влияние ЭЛС на гемореологический статус крыс SHR закономерно отразилось на повышении показателя доставки кислорода к тканям во всем исследуемом диапазоне скоро­стей сдвига (3-300 с”¹). Корреляционный анализ выявил высокую степень отрица­тельной взаимосвязи между вязкостью крови на скорости сдвига 100 с”¹ и деформируемостью эритроцитов на скорости сдвига 90 с” (г= -0,781; р<0,05) и высокую степень положительной корреляции между деформируемостью эритроцитов и ге­матокритом (r=0,775; р<0,05) у крыс SHR, леченных ЭЛС. Возникновение взаи­мосвязи между вязкостью крови и деформируемостью эритроцитов у крыс SHR, получавших ЭЛС свидетельствует о частичном восстановлении регуляции и включении компенсаторных механизмов реагирования на нарушения гомеостаза. Очевидно, положительное воздействие ЭЛС на микрореологические свойства (деформируемость и агрегация эритроцитов) обусловлено влиянием на количественный состав белков и липидов мембран красных клеток. [Казаков Ю.М., 1981; Мищук И.И., 1993]. ЭФП эритроцитов обусловлена отрица­тельным зарядом поверхности эритроцитарных мембран, которая, в свою очередь определяется содержанием в мембране гликофорина С. Гликофорин С – транс­мембранный гликопротеин, большая часть которого находится на наружной по­верхности мембраны, где локализован его гидрофильный N-концевой участок с которым связано 16 олигосахаридных боковых цепей, содержащих около 100 ос­татков углеводов, составляющих примерно 60% молекулярной масссы белка (бо­лее 90% углеводной части гликофорина С представлено сиаловой кислотой, кото­рая и определяет суммарный отрицательный заряд поверхности мембран эритро­цитов – дзета-потенциал) [Черницкий Е.А., Воробей A.B., 1981; Марри Р. и др., 1993; Геннис Р., 1997; Муравьев A.B., Чопоров C.B., 2009].

Курсовое применение ЭЛС у крыс SHR способствовало повышению ЭФП эритроцитов. Улучшение ЭФП эритроцитов крыс SUR, получавших ЭЛС также может быть обусловлено снижением концентрации фибриногена в плазме, поскольку его молекулы способны адсорбироваться на поверхности мембран эрит­роцитов и таким образом экранировать их отрицательный заряд [Левтов В.А. и др., 1982]. Повышение дзета-потенциала закономерно сочетается с ослаблением агрегации эритроцитов у крыс SHR, леченных ЭЛС.

Курсовое применение ЭЛХ у крыс с артериальной гипертензией способство­вало снижению вязкости плазмы, агрегации эритроцитов, концентрации фибрино­гена и повышению деформируемости эритроцитов. Выраженное воздействие ис­следуемого экстракта на гемореологические параметры приводило к существен­ному снижению вязкости цельной крови в диапазоне скоростей сдвига (7-300 с”¹). *

Воздействие ЭЛХ на весь спектр гемореологических показателей закономерно отразилось в повышении показателя доставки кислорода к тканям у крыс SHR. Корреляционный анализ позволил выявить высокую степень положительной вза­имосвязи между вязкостью крови и концентрацией фибриногена (г=0,88; р<0,05). Снижение содержания в крови фибриногена, которое наблюдается при использо­вании ЭЛХ и на других моделях СПВК нам представляется весьма ценным свой­ством препарата. Необходимо отметить, что способность снижать концентрацию фибриногена в плазме присутствует у всех исследуемых ЭЭСР в условиях боль­шинства моделей СПВК. Кроме снижения вязкости плазмы, другим важным след­ствием уменьшения концентрации фибриногена при использовании ЭЛХ является ослабление агрегации эритроцитов, которое происходит несмотря на повышение значений гематокрита у опытных животных. Вероятно, снижение гиперагрегации эритроцитов проявляется благодаря способности действующих начал исследуемо­го препарата восстанавливать отрицательный заряд поверхности мембран эритро­цитов, что проявляется в наблюдаемом нами повышении значений ЭФП.

Исследуемые экстракты на модели артериальной гипертензии обладали при­близительно равной активностью, эффективно снижая выраженность СПВК за счет воздействия как на макрореологические, так и микрореологические показа­тели.

Гемореологические нарушения являются важным элементом в патогенезе са­харного диабета. У пациентов, страдающих сахарным диабетом наблюдается по­вышение вязкости цельной крови [Caimi G, 1983; Simpson L.O, 1988], особенно в области низких скоростей сдвига [Sarno А. et al, 1983] и плазмы [Oughton J, Bar­nes AJ., 1981]. Причем степень повышения вязкости крови зависит от выражен­ности сосудистых осложнений [Lowe G.D. et al, 1980]. Однако у больных сахар­ным диабетом нередко наблюдается снижение показателя гематокрита, поэтому значения вязкости крови остаются в норме или повышены незначительно [Гале- нок В.А. и др., 1982]. Снижение гематокрита при сахарном диабете расценивается как ауторегуляторный механизм, защищающий целостность перфузии тканей при повышенной ригидности эритроцитов и сниженном дзета-потенциале их мембран [Галенок В.А. и др, 1982]. Агрегация эритроцитов у больных сахарным диабетом значительно выше по сравнению со здоровыми людьми [Кузник Б.И, Скипетров В.П, 4974; Volger Е, 1986]. Значительную роль в повышении агрегации эритро­цитов играет снижение отрицательного заряда поверхности их мембран. В норме в сосудах среднего диаметра (артериолы) эритроциты движутся на некотором расстоянии и определенным образом ориентированы друг относительно друга, образуя радиально-кольцевые системы [Хараш Л.М, Лапотников В.А, 1982]. Та­кая структура обеспечивает минимальное сопротивление току крови и, следова­тельно, минимальную вязкость. При уменьшении отрицательного заряда поверх­ности мембран эритроцитов структура потока крови нарушается, эритроциты сближаются, повышается вероятность их взаимодействия с образованием агрега­тов. Причиной уменьшения дзета-потенциала мембран эритроцитов является из­менение макромолекулярного состава плазмы, особенно гиперфибриногенемия и увеличение концентрации у-глобулинов. Молекулы фибриногена, имеющие низ­кий отрицательный заряд, экранируют заряд эритроцитов, способствуя их агрега­ции и увеличению вязкости крови [Абылаев Ж., 1980]. Получены данные, отра­жающие линейную зависимость между вязкостью крови, пересчитанной на стан­дартный гематокрит (45%) и концентрацией фибриногена [Галенок В.А. и др., 1982]. Образованию эритроцитарных агрегатов способствует также диспротеине- мия со снижением альбумино-глобулинового коэффициента [Schmid-Schonbein Н. et al., 1977]. Известно о существенном снижении деформационных свойств эрит­роцитов при сахарном диабете [Боднар П.Н. и др., 1984; Галенок В.А. и др., 1982]. Выраженность нарушений деформируемости эритроцитов максимальна у больных с микроангиопатиями в сравнении с больными без значительных сосуди­стых осложнений [Volger Е., 1986]. Обнаружено существенное снижение дефор­мируемости эритроцитов у больных сахарным диабетом, осложненном ретинола- тией [Melli М. et al., 1983]. Снижение деформируемости эритроцитов при сахар­ном диабете возникает в результате нарушения морфо-функционального состоя­ния мембран эритроцитов. Так, используя метод определения микровязкости мембран эритроцитов с помощью флюоресцентного зонда 1,6-дифенил-1,3,5- гексатриена обнаружены нарушения фосфолипидного состава мембран красных клеток у больных сахарным диабетом с преобладанием сфингомиелина и лизо- фосфатидилхолина и снижением фосфатидилэтаноламина [Otsuji S. et al., 1981]. Специфическим механизмом возникновения гемореологических нарушений при сахарном диабете является выраженная гипергликемия. При повышении концен­трации глюкозы в крови, превышающей 15 мМ/л значительно усиливается про­цесс неферментативного гликозилирования, отражающий тяжесть течения сахар­ного диабета и риск развития осложнений [Wells-Knecht K.J. et al., 1996; Brownlee M, 2000]. Гликозилирование гемоглобина и мембранных белков способно приво­дить к нарушению микрореологических свойств эритроцитов [McMillan D.E., Gion K.M., 1981; Williamson J.R. et al., 1985; Cecchin E. et al., 1987; Schwartz R.S. et al., 1991; Watala C. et al., 1992; Kuwajima S., 1993]. Необходимо отметить, что процесс неферментативного гликозилирования белков касается не только гемо­глобина и мембранных протеинов эритроцитов, но затрагивает также белки плаз­мы (альбумин, трансферрин, липопротеины), коллаген и белки эндотелия [Witz- tum J.L. et al., 1982; Mahaffey E.A. et al., 1984; Bucala R., Vlassara H., 1995; Tahara Y., Shima K., 1995; Lyons T.J., Jenkins A.J., 1997; Orchard Т. et al., 1997; Veiraiah A., 2005], что также может вносить свой вклад в формирование СПВК при сахар­ном диабете. Установлена тесная корреляция между уровнем глюкозы в крови и ее вязкостью [Cinar Y. et al., 2001]. Имеются данные о зависимости между степе­нью снижения деформируемости эритроцитов и концентрацией гликозилирован- ного гемоглобина [McMillan D.E., Gion K.M., 1981], а также гликозилированных белков эритроцитарной мембраны [Schwartz R.S. et al., 1991]. Очевидно, что ме­ханизмы формирования гемореологических нарушений при сахарном диабете разнообразны и представляют собой сложный комплекс межклеточных и межмо­лекулярных взаимодействий, являющихся элементами функциональных систем обеспечения гомеостаза в организме.

В наших исследованиях мы использовали модель сахарного диабета, вызван­ную введением стрептозотоцина [Ferner R.E., 1992]. В основе токсического дейст­вия стрептозотоцина лежит его способность повреждать бета-клетки, в результате накопления в них свободных радикалов кислорода [Ferner R.E., 1992]. Модель стрептозотоцин-индуцированного сахарного диабета характеризуется большей клинической адекватностью и патофизиологической обоснованностью, поскольку не разрушает бета-клетки островков Лангрганса полностью, а лишь частично, способствуя активации аутоиммунных процессов. При разрушении бета-клеток из них высвобождаются собственные цитоплазматические белки, в норме недоступ­ные для иммунной системы. Эти белки становятся аутоантигенами и вызывают аутоиммунную реакцию [Ferner R.E., 1992].

Воспроизведенный в наших условиях стрептозотоцин-индуцированный диа­бет у крыс сопровождается повышением вязкости крови во всем исследуемом диапазоне скоростей сдвига (3-300 с”¹), усилением агрегации эритроцитов и сни­жением их деформируемости на скоростях сдвига 90-890 с’¹, увеличением кон­центрации фибриногена. Показатель доставки кислорода к тканям снижался во всем исследуемом диапазоне скоростей сдвига (3-300 с”¹) у крыс со стрептозото- цин-индуцированным диабетом. Корреляционный анализ показал наличие сред­ней степени отрицательной взаимосвязи между вязкостью крови на скоростях сдвига 3-300 с”¹ и деформируемостью эритроцитов на скоростях сдвига 90-360 с”¹ (г=-0,67-0,79; р<0,05), полупериодом агрегации эритроцитов и концентрацией фибриногена (г=-0,73; р<0,05) и положительной взаимосвязи между концентраци­ей фибриногена и вязкостью плазмы (г=0,65; р<0,05). Обнаруженные взаимосвязи подтверждают закономерное участие как макро- так и микрореологических меха­низмов в формировании СПВК у крыс со стрептозотоциновым диабетом. Следует отметить, что развитие стрептозотоцин-индуцированного сахарного диабета со­провождалось существенным снижением массы тела животных к 14-му дню экс­перимента на 15% по сравнению с исходными значениями.

Таким образом, стрептозотоцин-индуцированный диабет характеризуется значительным увеличением концентрации глюкозы в крови и формированием СПВК, что делает возможным исследование активности перспективных геморео- логических средств в условиях данной модели.

Курсовое применение ЭЛС у крыс со стрептозотоцин-индуцированным диа­бетом способствовало снижению вязкости крови во всем исследуемом диапазоне скоростей сдвига (3-300 с”¹), агрегации эритроцитов, концентрации фибриногена и увеличению индекса деформируемости эритроцитов в диапазоне скоростей сдвига (90-890 с”¹). Снижение вязкости крови происходило, в основном за счет влияния исследуемого экстракта на агрегацию и деформируемость эритроцитов, что подтверждается данными корреляционного анализа. Корреляционный анализ выявил высокую степень отрицательной взаимосвязи между вязкостью крови на скоростях сдвига 100-300 с”¹ и деформируемостью эритроцитов на скоростях сдвига 90-360 с”¹ (г= -0,75-0,83; р<0,05), вязкостью крови в диапазоне скоростей сдвига 3-50 с’¹ и полупериодом агрегации эритроцитов (г= -0,75-0,83; р<0,05). Значительное улучшение микрореологических параметров под влиянием курсово­го применения ЭЛС способствовало увеличению показателя доставки кислорода к тканям в диапазоне скоростей сдвига 3-50 с”¹. Положительным свойством иссле­дуемого экстракта является его способность ограничивать потерю массы тела жи­вотными к 14-м суткам эксперимента. Помимо этого, ЭЛС проявил гипогликеми- ческую активность, более чем на 30% снижая концентрацию глюкозы в крови как в сравнении с контрольными показателями, так и в сравнении со значениями уровня глюкозы в опытной группе до введения исследуемого экстракта.

У крыс, получавших ЭЛХ в течение 14 дней наблюдалось снижение вязкости крови в диапазоне скоростей сдвига 3-10 с”¹, агрегации эритроцитов и улучшение деформируемости эритроцитов на скоростях сдвига 90-890 с”¹. Корреляционный анализ выявил высокую степень отрицательной взаимосвязи между вязкостью крови на скоростях сдвига 10-300 с”¹ и деформируемостью эритроцитов на скоро­стях сдвига 90-890 с”¹ (г= -0,69-0,82; р<0,05), вязкостью крови на скоростях сдви­га 5-300 с”¹ и полупериодом агрегации эритроцитов (г= -0,67-0,86; р<0,05). Это подтверждает активное участие микрореологических механизмов в ослаблении выраженности СПВК при стрептозотоцин-индуцированном диабете под действи­ем ЭЛХ. Положительное влияние исследуемого экстракта на гемореологические параметры способствует увеличению показателя доставки кислорода к тканям. Курсовое применение ЭЛХ у крыс со стрептозотоцин-индуцированным диабетом препятствовало потере массы тела животных к 14-му дню эксперимента и приво­дило к снижению уровня глюкозы в крови на 20% в сравнении с контролем и на 25% в сравнении со значениями в опытной группе до введения ЭЛХ.

Внутрижелудочное введение ЭСВ в течение 14 суток приводило к снижению агрегации эритроцитов, концентрации фибриногена и улучшению деформируемо­сти эритроцитов на скоростях сдвига 90-890 с”¹ у крыс со стрептозотоциновым диабетом. При корреляционном анализе установлена высокая степень отрица­тельной взаимосвязи между вязкостью крови на низких скоростях сдвига (3-7 с”¹) и полупериодом агрегации эритроцитов (1= -0,75-0,86; р<0,05), вязкостью крови на скоростях сдвига 5-7 с^-1 и деформируемостью эритроцитов на скоростях сдви­га 90 с”¹ (г= -0,74-0,77; р<0,05), вязкостью крови на скоростях сдвига 10-100 с^-1 и деформируемостью эритроцитов на скорости сдвига 360 с”¹ (г= -0,75-0,88; р<0,05); высокая степень положительной взаимосвязи выявлена между вязкостью крови на скоростях сдвига 50-100 с”¹ и гематокритом (г= -0,87-0,90; р<0,05), кон­центрацией фибриногена (г=0,84; р<0,05) и вязкостью плазмы (г=0,92; р<0,05). Полученные данные корреляционного анализа свидетельствуют о том, что актив­ность ЭСВ на модели стрептозотоцин-индуцированного диабета реализуется за счет влияния как на макро-, так и на микрореологические параметры. Однако, улучшение реологических свойств крови при использовании ЭСВ на модели стрептозотоцин-индуцированного диабета приводило к улучшению показателя доставки кислорода к тканям лишь при скоростях сдвига 3-7 с”¹, т.е. в менее зна­чимой для микрогемоциркуляции и газообмена области кровотока [Муравьев A.B., Чопоров C.B., 2009]. ЭСВ на модели стрептозотоцин-индуцированного диа­бета также как и другие экстракты ограничивал потерю массы тела животными к 14-му дню эксперимента и проявлял умеренную гипогликемическую активность.

Таким образом, экдистероидсодержащие экстракты на модели стрептозото­цин-индуцированного диабета обладают отчетливой гемореологической активно­стью, эффективно воздействуя на весь спектр гемореологических параметров (макро- и микрореологических), одновременно с этим проявляют гипогликемиче­скую активность и ограничивают потерю животными массы тела.

Несахарный диабет – сложное по патогенезу эндокринное заболевание, ос­новным симптомом которого является полиурия [Алёшин Б.В. и др., 1973]. Вне зависимости от этиологии полиурия приводит к потере жидкой части плазмы, ге- моконцентрации, что отражается в нарушении реологических свойств крови. Су­ществует линия крыс Brattleboro, воспроизводящая основные патогенетические факторы наследственного гипоталамического несахарного диабета (familial hypo- thalamic diabetes insipidus) [Valtin H, Schroeder H.A., 1964; Schmale H, Richter D, 1984].

У крыс линии Brattleboro в сравнении с крысами Вистар была повышена вяз­кость крови во всем исследуемом диапазоне скоростей сдвига (3-300 с”¹), вязкость плазмы, агрегация эритроцитов, концентрация фибриногена, показатель гематок­рита и снижена деформируемость эритроцитов при скоростях сдвига 90-890 с”¹. У крыс Brattleboro показатель доставки кислорода к тканям во всем исследуемом диапазоне скоростей сдвига был ниже на 13-28% в сравнении со значениями это­го показателя у крыс Вистар. Гемореологический профиль у крыс линии Brattle­boro значительно отличается от такового у крыс Вистар. У крыс линии Brattleboro выявлены высокие значения вязкости крови в широком диапазоне скоростей сдвига, даже превосходящие аналогичные показатели у спонтанно- гипертензивных крыс (линия SHR) и крыс Вистар с моделями сердечно­сосудистых расстройств – острая ишемия головного мозга и инфаркт миокарда *

[Плотников М.Б. и др., 1996; Плотников М.Б. и др, 1998а; Plotnikov M.B. et al, 2003]. При анализе макрореологических показателей у крыс линии Brattleboro об­ращает на себя внимание значительное повышение гематокрита, что обусловлено гемоконцентрацией и является следствием полиурии [Алёшин Б.В. и др, 1973]. Возрастание гематокрита закономерно приводит к повышению вязкости крови, причем зависимость эта носит не прямопропорциональный, а экспоненциальный характер [Левтов В.А. и др, 1982]. С точки зрения гемодинамики оптимальными считаются значения гематокрита 43-45%, при которых происходит максимальная доставка кислорода к органам (судя по р0₂ в тканях). Дальнейшее возрастание гематокрита сопровождается снижением доставки кислорода к тканям и умень­шением р0₂, то есть состоянием тканевой гипоксии [Муравьев A.B., Чопоров С.В, 2009]. Очевидно, этот феномен может проявляться у крыс линии Brattleboro, у которых при значении гематокрита 49%, настолько повышается вязкость крови, что это приводит к резкому снижению показателя доставки кислорода к тканям.

У крыс Brattleboro выявлены отчетливые нарушения микрореологических показателей – агрегации и деформируемости эритроцитов. Значения этих показа­телей во многом определяются состоянием мембран эритроцитов и активностью мембраносвязанных ферментов, ответственных за поддержание ионного гомео- стаза клеток [Новицкий В.В. и др., 2004; De Franceschi L. et al., 2001; Liu F. et al., 2005]. В основе патогенеза несахарного диабета лежит нарушение выработки ан­тидиуретического гормона – вазопрессина [Алёшин Б.В. и др., 1973]. При недос­татке вазопрессина нарушается обмен воды и электролитов, что может играть су­щественную роль в формировании нарушений ионного гомеостаза эритроцитов. При дефиците вазопрессина наблюдается гипернатриемия, гиперосмоллярность плазмы, гипокалиемия [Somova L. et al., 1985] и нарушение обмена ионов Na⁺ и К⁺ в эритроцитах [Doczi T. et al., 1988; Talib Н.К. et al., 1992]. Известно, что нару­шения ионного гомеостаза эритроцитов может приводить к изменению морфо- функционального состояния красных клеток крови с появлением в сосудистом русле эритроцитов с патологически измененными формами, склонных к повы­шенной агрегационной активности и, одновременно характеризующиеся снижен­ной деформируемостью [Левтов В.А. и др., 1982; Муравьев А.В., Чопоров C.B., 2009; Новицкий В.В. и др., 2004]. Повышенной агрегации эритроцитов может также способствовать возрастание в плазме крови содержания фибриногена, кон­центрация которого у крыс линии Brattleboro в 1,5 раза превосходит таковую у крыс Вистар. Фибриноген обладает большой молекулярной массой, выраженной ассиметричностью молекулы и играет активную роль в процессе агрегации эрит­роцитов по мостиковому механизму [Левтов В.А. и др., 1982; Муравьев А.В., Чо­поров C.B., 2009].

У крыс линии Brattleboro, в сравнении с крысами Вистар утрачивалась взаи­мосвязь вязкости крови с макрореологическими параметрами (гематокритом и вязкостью плазмы) и микрореологическими показателями (агрегация и деформи­руемость эритроцитов), что свидетельствует о предельном случае состояния диз- регуляции, при котором адаптация невозможна и ведущими становятся деструк­тивные процессы [Гольдберг Е.Д. и др., 1997]. Похожие закономерности обнару­жены нами при генетически детерминированной артериальной гипертензии (кры- си линии SHR).

Курсовое применение ЭЛС у крыс с НГНД способствовало снижению вязко­сти крови во всем исследуемом диапазоне скоростей сдвига (3-300 с”¹). Столь значительное снижение вязкости крови было обусловлено способностью иссле­дуемого экстракта уменьшать вязкость плазмы, концентрацию фибриногена, агре­гацию эритроцитов и увеличивать деформируемость эритроцитов в диапазоне скоростей сдвига (90-890 с”¹). Эффективное воздействие ЭЛС на гемореологиче- ские параметры крыс с НГНД закономерно привело к повышению показателя до­ставки кислорода к тканям в диапазоне скоростей сдвига 3-100 с”¹. Корреляцион­ный анализ выявил среднюю степень отрицательной взаимосвязи между вязко­стью крови на скоростях сдвига 50-300 с”¹ и индексом деформируемости эритроцитов (г= -0,63-0,74; р<0,05) и вязкостью крови на скоростях сдвига 3-10 с” и по­лупериодом агрегации эритроцитов (г= -0,71-0,78; р<0,05). Таким образом, ЭЛС снижает вязкость крови при НГНД за счет влияния на микрореологические пара­метры, которым отдается ведущая роль в процессе эффективной микрогемоцир- куляции и оксигенации тканей. Необходимо отметить, что улучшение показателя доставки кислорода к тканям было обусловлено не оптимальным снижением ге­матокрита, а положительным влиянием на деформируемость и агрегацию эритро­цитов, которые являются процессами в наибольшей степени определяющими зна­чение вязкости крови при назначении ЭЛС крысам с НГНД.

Применение ЭЛХ у крыс линии ВгаИ1еЬого способствовало уменьшению вяз­кости плазмы, концентрации фибриногена, агрегации эритроцитов и улучшению деформируемости эритроцитов на скоростях сдвига 90-890 с”¹. Влияние иссле­дуемого экстракта на весь спектр гемореологических параметров закономерно привело к снижению вязкости крови во всем исследуемом диапазоне скоростей сдвига (3-300 с”¹). Однако на фоне высоких значений гематокрита (49%) иссле­дуемому экстракту удалось повысить показатель доставки кислорода к тканям только на низких скоростях сдвига (3-7 с”¹), характеризующих область кровотока

менее значимую для процессов микрогемоциркуляции и оксигенации. Таким образом, ЭЛХ снижает выраженность СПВК у крыс с НГНД за счет влияния, как на микрореологические (агрегация и деформируемость эритро­цитов), так и на макрореологические (вязкость плазмы и концентрация фибрино­гена) параметры.

Таким образом, НГНД сопровождается разобщением элементов функцио­нальных систем (реологии крови) с потерей взаимосвязей между гемореологиче- скими параметрами, а экдистероидсодержащие экстракты не только улучшают гемореологический статус в целом, но и повышает степень взаимосвязи между отдельными гемореологическими параметрами. Это свидетельствует о восстанов­ление регуляторных механизмов и повышение адаптационных возможностей у крыс с НГНД под влиянием исследуемых экстрактов.

В настоящее время все более актуальным становится проблема влияния фи­зических нагрузок на реологические свойства крови [Бобков Ю.Г. и др., 1984; Wagner P.D., 1988; Roca J. et al., 1989; González-Alonso J., Calbet J.A., 2003; How- lett R.A. et al., 2003; Richardson R.S., 2003; Mortensen S.P. et al., 2005; Lindenfeld J. et al., 2005; Saltin В., Calbeit J.A.L., 2006]. Эффект физических нагрузок на реоло­гические свойства крови у здоровых людей и особенно у спортсменов не является однонаправленным и зависит от различных факторов, таких как характер мышеч­ной работы, интенсивность, продолжительность периода восстановления после тренировок и многих других [Ernst Е., Schmid М., 1984; Ernst Е., Matrai А., 1985; Signorelli S. et al., 1985; Martins E., Silva J., 1988; Brun J.-F. et al., 1989; Brun J.F. et al., 1991; Nageswari K. et al., 2000; Manetta J. et al., 2006]. Большинство авторов сходятся во мнении о том, что тяжелые и интенсивные физические упражнения сопровождаются значительным неблагоприятными изменениями реологических свойств крови [Geor R.J., Weiss D.J., Smith С.М., 1994; Adachi H. et al., 2000; Letcher R.L. et al., 1981; Brun J.-F., 2002; Ernst E., 1987; El-Sayed M.S. et al., 2005; Yalcin O. et al., 2000; Khaled S. et al., 1999; Caillaud C. et al., 2002]. Нарушения реологических свойств крови при физических нагрузках отрицательно сказыва­ются на процессах кровоснабжения и доставки кислорода тканям [Schmid- Schonbein Н., 1988; Lipowsky H.H. et al., 1993; Secomb T.W., Hsu R., 1996; Cabel M. et al., 1997; Bishop J.J. et al., 2001; Varlet-Marie E., Brun J., 2004]. Регулярные тренировки способны улучшать показатели реологии крови в покое [Ernst Е., 1987; Neuhaus D., Gaetgens P., 1994; Brun J.-F., 2002; Ernst E., Matrai A., 1985; Tel­ford R.D. et al., 1994; Hardeman M.R. et al., 1995; El-Sayed M.S., 1998; El-Sayed M.S. et. al., 2005] и снижать выраженность нарушений гемореологических пара­метров при истощающих нагрузках [Signorelli S. et al., 1985; Connes P. et al., 2007]. Кроме этого, низкоинтенсивные тренировочные нагрузки на тредмиле приводят к положительным изменениям гемореологического статуса в посттренировочном периоде [Ernst е., Matrai А., 1985; Ernst Е., 1987; Neuhaus D., Gaehtgens P., 1994; Nageswari К. et al., 2000; Manetta J. et al., 2006].

Умеренная нагрузка тренировочного характера также положительно сказы­вается на реологических параметрах и проявляется улучшением клинического со­стояния больных с сердечно-сосудистой патологией [Ernst Е., Matrai А., 1987; Dressendorfer R.H. et al., 1995; Dugmore L.D. et al., 1999]. Экспериментально уста­новлено, что использование низкоинтенсивных тренировочных нагрузок на тред­миле повышает толерантность к ишемическим поражениям миокарда [Thorp D.B. et al., 2007; Le Page C. et al., 2009], улучшает кровоснабжение и локальную гемо­динамику пораженного органа [Duncker D.J., Bache R.J., 2008]. Это особенно важ­но в условиях декомпенсированной кардио-респираторной недостаточности после острых ишемических повреждений миокарда [Blumenthal J.A. et al., 1988]. Однако влияние физических нагрузок на реологические свойства крови у пациентов дан­ного профиля не всегда однозначны. Существуют данные как об улучшении ге­мореологических параметров при нагрузках тренировочного характера у пациен­тов, перенесших инфаркт миокарда, так и об ухудшении их гемореологического статуса [Margonato А. et al., 1985]. И хотя в целом признаётся, что систематиче­ские тренировочные нагрузки способствуют улучшению гемореологического ста­туса [Ernst Е., 1987; Neuhaus D., Gaehtgens P., 1994; Coppola L. et al., 2004], а низкоинтенсивные, циклические физические тренировки аэробного характера могут быть рекомендованы в реабилитационной терапии постинфарктных больных [Dugmore L.D. et al., 1999], проблема использования тренировочных нагрузок в качестве средства улучшения реологических свойств крови в норме и при сердеч­но-сосудистых заболеваниях ещё далека от окончательного решения [El-Sayed M.S. et al., 2005; Brun J.-F., 2002]. По мнению M.S. El-Sayed et al. [2005], физиоло­гические механизмы ответственные за функциональные последствия гемореоло- гических изменений при значительных физических нагрузках продолжают оста­ваться дискуссионными; связь интенсивных физических нагрузок и состояния пе­ретренированности с нарушениями гемореологического статуса нуждаются в дальнейших исследованиях. J.-F. Brun [2002] считает, что гемореологические из­мерения рассматриваются как чувствительные маркеры тренированности и пере­тренированности в ходе выполнения высокоинтенсивных упражнений.

В наших исследованиях у животных, подвергнутых истощающей физической нагрузке без предварительного тренировочного периода гемореологический ста­тус существенно отличался от показателей интактных крыс, что проявлялось в повышении вязкости крови в диапазоне скоростей сдвига 3-300 с”¹, агрегации эритроцитов и в уменьшении деформируемости эритроцитов во всем исследуе­мом диапазоне скоростей сдвига (90-890 с”¹). Анализируя полученные данные можно констатировать, что при однократной истощающей физической нагрузке умеренной мощности формируется СПВК, характеризующийся преимущественно сдвигами показателей клеточной реологии: снижением деформируемости и уве­личением агрегации эритроцитов. Наши результаты согласуются с данными дру­гих авторов, продемонстрировавших проявление СПВК при предъявлении крысам нагрузки на тредмиле [Senturk U.K. et al., 2001], при истощающей физической на­грузке у лошадей [Weiss DJ. et al., 1996; Geor R.J. et al., 1994] и атлетов [Varlet-

Marie E., Brun J., 2004; van der Burg G.E. et al., 1995]. В других иследованиях о вязкости крови, как “short-term effects of exercise” – краткосрочный эффект физи­ческой нагрузки [2002]. Повышение вязкости крови может оказывать неблагопри­ятное. воздействие на кровообращение в условиях микроциркуляторного русла и доставку кислорода к тканям [El-Sayed M.S. et al., 2005]. Действительно, при ис­тощающей физической нагрузке у крыс происходило снижение доставки кисло­рода тканям: коэффициент Ht/r| был ниже значений у интактных животных на 15% (р<0,05).

В наших экспериментах средняя продолжительность бега крыс до полного истощения составила 166±23 мин. Хотя изменения вязкости крови и микрореоло­гических показателей при интенсивной физической нагрузке у нетренированных крыс и носили закономерный характер, они скорее всего не являются основными факторами, лимитирующими работоспособность животных. Корреляционный анализ выявил низкий уровень взаимосвязи между продолжительностью бега на тредмиле и вязкостью крови в диапазоне скоростей сдвига от 3 до 300 с”¹ (г=0,03- 0,18; р>0,05), агрегацией эритроцитов (г=0,23; р=0,6) и деформируемостью эрит­роцитов в диапазоне скоростей сдвига 360-890 с”¹ (г= -0,03-0,39; р>0,05). Более вероятно, что в основе процесса полного утомления крыс при выполнении ими физической нагрузки лежит выраженная гипогликемия. У животных контрольной группы уровень глюкозы снижался до 2,4 мМ/л и был в 2,9 раза ниже чем у ин­тактных животных; содержание лактата увеличивалось по сравнению со значе­ниями у интактных животных в 2,3 раза. Это согласуется с данным о прекраще­нии выполнения физической работы человеком при снижении уровня глюкозы в крови до критической величины, составляющей 2,7-3,3 мМ/л [Бобков Ю.Г. и др., 1984].

При истощающей физической нагрузке у нетренированных животных проис­ходит повышение вязкости крови, обусловленное ухудшением микрореологиче­ских показателей – деформируемости и агрегации эритроцитов. Снижение дефор­мируемости эритроцитов приводит к нарушению движения эритроцитов в микро- циркуляторном русле, в результате уменьшается отдача кислорода тканям. Уси­ленная агрегация красных клеток крови способствует снижению плотности пер- фузируемых капилляров, что также влияет на уровень тканевой оксигенации. Ме­ханизмы ухудшения гемореологических параметров в группах животных, под­вергнутых однократной истощающей физической нагрузке, возможно связаны с тем, что избыточная мышечная работа может способствовать состояниям стресса и перетренированности [Mackinnon L.T., 2000], что приводит к снижению работоспособности как за счет метаболических нарушений [Tavazzi В. et al., 2000; War­burton D.E.R. et al., 2002], в частности, накопление лактата [Varlet-Marie Е., Brun J., 2004] и активации процессов перекисного окисления [Ajmani R.S. et al., 2003; Senturk U.K. et al., 2001], так и за счет развития процессов центрального торможе­ния [Бобков Ю.Г. и др., 1984].

Существенным звеном расстройств реологических свойств эритроцитов при интенсивных физических нагрузках является нарушение ионного баланса. Интен­сивные физические нагрузки приводят к потере эритроцитами ионов Mg и К , с

одновременным повышением внутриклеточного содержания ионов Са [Casoni I,2+ + et al., 1990; Newhouse I.L., Finstad E.W., 2000]. Важная роль ионов Mg и К в поддержании гомеостаза эритроцитов известна [Meier W. et al., 1985; Dupuy-Fons С. et al., 1995]. Магний является прямым трансмембранным антагонистом кальция [Zhang A. et al., 1992]. При недостатке магния нарушается работа Na/K/Cl-Hacoca, Na/K-АТФ-азы и повышается активность К/С1-транспорта, что приводит к сниже­нию уровня гидратации клеток, потере К⁺ и воды и вызывает нарушение морфо- функциональных свойств эритроцитов [De Franceschi L. et al., 2001]. Кроме того, при дефиците магния происходит уменьшение антиоксидантного потенциала эритроцитов [Freedman A.M. et al., 1992], снижение активности гликолиза и уровня АТФ [Laughlin M.R., Thompson D., 1996], накопление ионов кальция [Zhang А. et al., 1992]. Ионы Са способны через активацию системы кальций-кальмодулин вызывать комплекс взаимодействий между мембранными (альфа- и бета- спектрин, актин, протеин 4.1, аддуцин) и интегральными (белок полосы 3, глико- форины) протеинами [Takakuwa Y., Mohandas N., 1988; Tanaka Т. et al., 1991; An X.L., Takakuwa Y., 1996; Liu F. et al., 2005]. В результате этих процессов происхо­дит усиление поперечных связей между молекулами актина и повышение сродст­ва белка полосы 3 к анкирину, приводящее к росту ригидности протеинового ске­лета мембраны эритроцита. С другой стороны, диссоциация гликофорина С и ин­тегральных протеинов приводит к дефрагментации мембраны, что ведет к умень­шению площади поверхности мембраны, снижению ее отношения к объему и ри- гидификации всего эритроцита [Chang S.H., Low P.S., 2005; Manno S. et al., 2005] и в конечном итоге проявляется снижением деформируемости красных клеток [Bessis М., Mohandas N., 1975].

При однократной истощающей физической нагрузке умеренной мощности формируется синдром повышенной вязкости крови (СПВК), характеризующийся преимущественно сдвигами показателей клеточной реологии (снижение дефор­мируемости и увеличение агрегации эритроцитов). В связи с этим, в условиях ис­тощающей физической нагрузки наиболее актуальным фармакологическим на­правлением является воздействие на показатели клеточной гемореологии – деформируемость и агрегацию эритроцитов, вносящих значительный вклад в улуч­шении гемореологического статуса.

У животных без предварительного тренировочного периода в условиях мо­дели истощающей физической нагрузки ЭЛС и ЭСВ проявили отчетливую гемо- реологическую активность, эффективно снижая вязкость крови во всем исследуе­мом диапазоне скоростей сдвига 3-300 с’¹, агрегацию эритроцитов и улучшали деформируемость эритроцитов в диапазоне скоростей сдвига 90-890 с’¹. Корреля­ционный анализ выявил среднюю степень отрицательной взаимосвязи между вяз­костью крови на скорости сдвига 100-300 с’¹ и индексом деформируемости эрит­роцитов в диапазоне скоростей сдвига 90-890 с”¹ (г= -0,67-0,72; р<0,05), вязко­стью крови на скоростях сдвига 3-10 с”¹ и полупериодом агрегации эритроцитов (г= -0,63-0,75; р<0,05). Таким образом, снижение вязкости крови происходило за счет влияния исследуемых экстрактов на клеточные реологические факторы – аг­регацию и деформируемость эритроцитов. Вместе с тем, средняя продолжитель­ность бега при истощающей физической нагрузке у нетренированных крыс, полу­чавших ЭЭСР достоверно не отличалась от значений в контрольной группе. В группе животных, получавших ЭЭСР, как и у контрольных животных, истощаю­щая физическая нагрузка приводила к развитию выраженной гипогликемии. Хотя содержание лактата в крови было несколько ниже, чем у крыс контрольной груп­пы, а содержание пирувата не отличалось от значений в группе интактных живот­ных, соотношение лактат/пируват сохранялось на повышенном уровне, отражаю­щем активное течение процессов анаэробного обмена.

Таким образом, у нетренированных животных ЭЭСР при курсовом примене­нии продемонстрировали наличие отчетливой гемореологической активности на модели истощающей физической нагрузки, но оказались неспособными повышать работоспособность и влиять на механизмы развития утомления.

Иные закономерности выявлены нами в условиях истощающей физической нагрузки у крыс после тренировочного периода. Гемореологические параметры (вязкость крови, вязкость плазмы, гематокрит и полупериод агрегации эритроци­тов) у животных, подвергнутых однократной истощающей физической нагрузке с предварительным тренировочным периодом, статистически достоверно не отли­чались от показателей интактных животных. Этот феномен проявлялся и в экспе­риментах других исследователей: в ответ на предъявление физической нагрузки выраженность сдвигов гемореологических показателей (вязкости крови, агрега­ции и деформируемости эритроцитов) была менее выраженной у тренированных животных, чем у нетренированных [Левин В.Н, Муравьев А.В, 1985; Уа1ст О. е1 а1, 2000]. Вместе с тем, значения ИДЭ на высоких скоростях сдвига были сущест­венно ниже значений показателей у интактных животных, что также согласуется с данными, полученными у тренирующихся атлетов, у которых максимальные уп­ражнения не влияли на показатели агрегации эритроцитов, но ухудшали их де­формируемость [СоппеБ Р. а1, 2007]. Очевидно, что отсутствие ярко выражен­ного СПВК у животных с предварительным тренировочным периодом связано с положительным влиянием физических тренировок на реологические свойства крови, так как физические нагрузки тренировочного характера способны ограни­чивать развитие значительных гемореологических расстройств [Уа1ст О. е1 а1, 2000]:

Важно отметить, что в группе тренированных крыс показатель доставки ки­слорода к тканям был достоверно повышен на 23% по сравнению со значениями у нетренированных крыс и не отличался от значений у интактных животных.

У животных с предварительной тренировкой время бега до истощения составило 210±20 мин, что на 21% (р<0,05) превышало этот показатель у нетрениро­ванных крыс. При этом у тренированых крыс после истощающей нагрузки проис­ходило умеренное снижение содержания глюкозы в крови; содержание лактата было достоверно выше в 2,7 раза, уровень пирувата возрастал более чем в 2 раза, а отношение лактат/пируват не изменялось по сравнению с показателями нетре­нированных крыс. Наблюдаемые изменения исследованных показателей углевод­ного обмена позволяют сделать вывод о том, что энергетическое обеспечение ор­ганизма продолжает носить преимущественно анаэробный характер [Бобков Ю.Г. и др., 1984].

У крыс с предварительным тренировочным периодом, получавших ЭЭСР время бега в истощающем режиме было достоверно повышено на 37-56% в срав­нении со значениями этих показателей у тренированных крыс, не получавших ис­следуемых экстрактов. При этом повышение работоспособности было связано не только с влиянием экдистероидсодержащих препаратов на углеводный обмен. Содержание глюкозы и пирувата в крови крыс опытных и контрольных трениро­ванных животных статистически значимо не различались, однако под влиянием ЭЭСР происходило существенное снижение концентрации лактата. Мы полагаем, что повышение работоспособности под влиянием ЭЭСР, в большей степени могло быть обусловлено их гемореологическим эффектом. По сравнению с тренирован­ными животными, не леченными ЭЭСР у тренированных животных, получавших препараты, после истощающей физической нагрузки были достоверно повышены значения следующих гемореологических показателей: гематокрита (на 7-11%), полупериода агрегации эритроцитов (на 25-39%) и ИДЭ при скоростях сдвига 90­890 с”¹ (на 15-22%).

Выраженное возрастание гематокрита под влиянием терапии ЭЭСР совмест­но с тренировочными нагрузками может быть фактором, повышающим толерант­ность к физической нагрузке. Очевидно, что повышение гематокрита является ре­зультатом комплексного воздействия тренировок и применения ЭЭСР, так как этот феномен не проявлялся при применении исследуемых экстрактов у нетрени­рованных крыс и у крыс после тренировочного периода, не получавших ЭЭСР. Полагаем, что в данном случае можно также исключить рост гематокрита за счет гемоконцентрации при физических нагрузках, возникающих в результате перехо­да жидкой части крови в интерстициальное пространство [El-Sayed M.S. et al., 2005], так как вязкость плазмы и концентрация фибриногена существенно не от­личились от значений у интактных животных. Повышение гематокрита должно было закономерно приводить к возрастанию вязкости крови [Pearson Т.С., 2001; Saunders D.K. et al., 2002]. Однако этого не происходило: у животных группы с предварительным тренировочным периодом, получавших ЭЭСР вязкость крови в диапазоне высоких скоростей сдвига была близка к значениям у тренированных крыс без введения ЭЭСР и у интактных животных. Более того, у тренированных животных с введением ЭЭСР вязкость крови при низких скоростях сдвига (до 10 с”¹) была ниже значений у тренированных крыс без введения препаратов (0,1>р>0,05). Последнее, вероятно, было связано с выраженным антиагрегацион- ным эффектом препаратов на эритроциты, так как, кроме макрореологических по­казателей, именно агрегация эритроцитов является фактором, определяющим вяз­кость крови в области низких скоростей сдвига [Chen S., Lung L., 1977; Dintenfass L. 1976]. Само увеличение гематокрита в тренировочном периоде рассматривает­ся как положительный фактор, повышающий кислородную емкость крови [Бобков Ю.Г. и др., 1984]. Повышение гематокрита при близких к норме значениях вязко­сти крови обусловливает возрастание расчетного показателя доставки кислорода к тканяЫ. Этот показатель в группе предварительно тренированных крыс, получав­ших ЭЭСР был выше на 11-25% (р<0,05) значений у тренированных крыс, не по­лучавших исследуемых экстрактов, что видимо, создавало условия для выполне­ния значительно более длительной работы аэробного характера.

По нашему мнению, влияние ЭЭСР на микрореологические показатели – аг­регацию и деформируемость эритроцитов – является ключевым в их актопротекторном действии. Тренировочные нагрузки закономерно улучшают показатели реологии крови (вязкость крови и плазмы, агрегацию эритроцитов) и ограничи­вают патологические сдвиги этих показателей в процессе выполнения интенсив­ной физической нагрузки [Левин В.Н., Муравьев A.B., 1985; Yalcin О. et al., 2000; Connes Р. et al., 2007]. Вместе с тем, деформируемость эритроцитов сильно зави­сит от длительности и интенсивности физических нагрузок [Neuhaus D., Gaehtgens P.; El-Sayed M.S., 1998; Dumortier M. et al., 2002; Signorelli S et al., 1985; Varlet- Marie E., Brun J.F., 2004], а корригирующее влияние предварительных тренировок на сдвиги деформируемости эритроцитов при интенсивных нагрузках, как правило, проявляется незначительно [Yalcin О. et al., 2000]. Е. Varlet-Marie and J.-F. Brun [2004] связывают ухудшение деформируемости в процессе выполнения фи­зической нагрузки с накоплением в крови лактата. Другим процессом, развиваю­щимся при интенсивных физических нагрузках, является оксидативный стресс [Yalcin О. et al., 2000; Ajmani R.S. et al., 2003; El-Sayed M.S. et al., 2005; Senturk U.K. et al., 2001, 2005ab; Oostenbrug G.S. et al., 1997; Sen C.K. et al., 1995; Szygula Z. et al., 1990; El-Sayed M.S. et al., 2005]; отрицательное воздействие свободных радикалов, образующихся при оксидативном стрессе, на мембраны эритроцитов, приводящих к снижению деформируемости эритроцитов и повышению их агрегации, хорошо известно [Baskurt O.K., Meiselman H.J., 1999; Chung T.W., Но C.P., 1999; Mo J. et al., 1993; Watanabe H. et al., 1990]. Можно предположить, что ЭЭСР улучшает деформируемость эритроцитов в условиях интенсивных физических на­грузок за счет проявления антиоксидантной активности [Kokoska L., Janovska D., 2009; Miliauskas G.et al., 2005; Koleckar V. et al., 2008]. Ключевое значение поло­жительного влияния ЭЭСР на деформируемость эритроцитов в условиях исто­щающей физической нагрузки подтверждается данными корреляционного анали­за, который выявил тесную связь между продолжительностью бега и деформи­руемостью эритроцитов на скорости сдвига 360-890 с”¹ (г=0,83-0,88, р<0,05). По­вышение деформируемости эритроцитов особенно важно, так как при этом улуч­шается процесс кровообращения на уровне микрососудов, где и происходит ос­новной газообмен О2/СО2 между кровью и тканями. Деформируемость эритроци­тов определяет не только процесс движения эритроцитов по микрососудам, но и скорость отдачи кислорода красными клетками [MaedaN., Shiga Т., 1994].

Влияние ЭЭСР на агрегацию эритроцитов также может вносить свой вклад в актопроекторный эффект тренировок и сохранение аэробного характера работы. Курсовое применение ЭЭСР у животных при истощающей физической нагрузке с предварительным тренировочным периодом способствовало снижению агрегаци- онной активности эритроцитов: полупериод агрегации эритроцитов в группе тре­нированных животных, получавших ЭЭСР достоверно превосходил величину этого показателя как в группе тренированных крыс, не получавших препаратов, так и у интактных животных. Агрегация эритроцитов также является важным па­раметром, оказывающим существенное влияние на оксигенацию тканей: процесс образования внутрисосудистых эритроцитарных агрегатов напрямую связан с формированием пристеночного бесклеточного .слоя плазмы, выступающего в ка­честве диффузионного барьера для кислорода, в результате нормализуется дезок- сигенация эритроцитов [Tateishi N. et al., 1999; Tateishi N. et al., 2001].

Помимо участия реологических механизмов в процессах повышения толе­рантности к физической нагрузке, нельзя исключить, что в актопротекторный эф­фект экдистероидсодержащих экстрактов самостоятельный вклад может вносить также наличие у них адаптогенной активности [Сыров В.Н., 1994; Сальник Б.Ю., 1966; Володин В.В., 2005; Kokoska L., Janovska D., 2009]. Адаптогены способны замедлять истощение центральной нервной системы, как при физических, так и при эмоциональных нагрузках [Поветьева Т.Н., Пашинский В.Г., 2005], что в ус­ловиях данной модели, когда работа совершается под влиянием негативной сти­муляции (электрический ток), является весьма важным.

Таким образом, ЭЭСР на модели истощающей физической нагрузки проде­монстрировали выраженную гемореологическую активность, как в группе нетре­нированных, так и в группе тренированных крыс, однако, актопротекторный эф­фект экдистероидсодержащих препаратов проявлялся лишь в группах предвари­тельно тренированных животных.

Практическая реализация актопротекторного эффекта ЭЭСР заключается в их использовании в спортивной медицине, для ускорения адаптации у лиц, чья производственная деятельность связана с экстремальными условиями и для по­вышения толерантности к физическим нагрузкам у пациентов, страдающих сер­дечно-сосудистыми заболеваниями. Последнее направление является весьма актуальным, поскольку повышение качества жизни пациентов сердечно­сосудистого профиля является важной медико-социальной проблемой. В литера­туре имеется достаточно сведений, что низкоинтенсивные циклические физиче­ские упражнения рассматриваются, как форма реабилитации после острого ин­фаркта миокарда, благоприятно влияющие на показатели работы сердца, систем­ной гемодинамики, кислородтранспортную функцию, а также показатели, опре­деляющие качество жизни пациентов [Zohman L.R. et al, 1983; Blumenthal J.A. et al, 1988; Dressendorfer R.H. et al, 1995; Stewart K.J. et al, 1998; Dugmore L.D. et al, 1999; Jolliffe J.A. et al, 2000; Sakuragi S. et al, 2003; Otsuka Y. et al, 2003;

«Duncker D.J, Bache R.J, 2008; Le Page C. et al, 2009]. Имеются эксперименталь­ные доказательства того, что тренировочные нагрузки на тредмиле улучшают функциональное состояние сердечной деятельности в постишемический период [Le Page С. et al, 2009] и повышают толерантность миокарда к ишемии у мужчин [Thorp D.B. et al, 2007]. У пациентов среднего возраста с кардиоваскулярным риском (артериальная гипертензия, гиперлипопротеидемия, избыточный вес) ре­гулярные упражнения на тредмиле приводили к улучшению деформируемости эритроцитов, показателю, который отражает капиллярный кровоток [Lowe G.D, 1987] или тканевую перфузию [Lennie S.E. et al, 1987]. Е.Е. Ernst и A. Matrai [1987] определяют тренировочные нагрузки как форму «гемореологической тера­пии», повышающую текучесть крови у пациентов с ишемическими повреждения­ми. Однако изучения эффекта средств, обладающих гемореологической активно­стью, применяемых совместно с тренировками на показатели реологии крови в период после инфаркта миокарда не проводились.

Наши исследования касаются оценки эффективности совместного использо­вания ЭЭСР и низкоинтенсивных тренировочных нагрузок в качестве комплекса, улучшающего гемореологический статус и повышающего толерантность к физи­ческим нагрузкам у крыс с инфарктом миокарда.

Воспроизведенный инфаркт миокарда у крыс сопровождался повышением вязкости крови во всем исследуемом диапазоне скоростей сдвига (3-300 с”¹), кон­центрации фибриногена, агрегации эритроцитов и снижением деформируемости красных клеток. Нарушения гемореологического статуса у крыс с инфарктом миокарда закономерно приводили к снижению показателя доставки кислорода к тканям. Гемореологические нарушения, возникающие после инфаркта миокарда, рассматриваются как неотъемлемый компонент ближайших последствий течения этого заболевания и его исхода. При остром инфаркте миокарда формируется вы­раженный СПВК [Катюхин JT.H. и др., 1999; Dintenfass L., 1985; Zannad F. et al., 1985; Tozzi-Ciancarelli M.G. et al., 1993; Meade T.W., 1995; Sund M. et al., 1998; Penco M. et al., 2000], который сохраняется в последующие сроки, несмотря на благоприятное клиническое течение заболевания [Caimi G. et al., 2003].

Биохимические показатели животных с инфарктом миокарда незначительно отличались от соответствующих значений у интактных животных. Отмечалась лишь .тенденция к повышению концентрации глюкозы в крови.

Ежедневная дозированная физическая нагрузка низкой интенсивности, предъявляемая крысам с инфарктом миокарда в течение 5 дней, приводила к сни­жению вязкости крови в диапазоне скоростей сдвига 3-300 с”¹, увеличению де­формируемости эритроцитов в диапазоне скоростей сдвига 90-890 с”¹ и повыше­нию полупериода агрегации эритроцитов, что характеризует ослабление эритро- цитарной агрегации, однако все эти изменения носили характер тенденции (0,1>р>0,05) в сравнении с группой животных без физической нагрузки. Возмож­но, отсутствие закономерных изменений обусловлено недостаточной продолжи­тельностью курса дозированной физической нагрузки. Изменение показателя дос­тавки кислорода к тканям также было недостоверным. Возможно, поэтому физи­ческая нагрузка низкой интенсивности вызвала существенную перестройку угле­водного обмена. У крыс с инфарктом миокарда, подвергнутых физической на­грузке на фоне умеренного возрастания уровня глюкозы в крови (на 23%) значи­тельно и достоверно увеличилась концентрация молочной и пировиноградной ки­слот в крови (в 3 раза и на 37% соответственно) и возросло отношение лак- тат/пируват в 2 раза по сравнению со значениями у интактных животных. Подоб­ная биохимическая картина соответствует клиническим данным [Деменьтева И.И., 2002] и служит признаком превалирования в организме анаэробных процес­сов являющихся весьма невыгодными и отражающими снижение энергопродук­ции в целом. Накопление недоокисленных продуктов в организме формирует так называемый лактатный «долг», который медленно покрывается организмом, осо­бенно в условиях кардио-респираторной недостаточности, сопровождающей сер­дечно-сосудистые заболевания. Накопление лактата напрямую связано с наруше­нием микрореологических свойств эритроцитов – их способностью деформиро­ваться, т.е. осуществлять необходимую перфузию микроциркуляторного русла и обеспечивать оптимальный газообмен между кровью и тканями [Мельников A.A., Викулов А.Д., 2008].

Выявленные сдвиги показателей углеводного обмена у животных с инфарк­том миокарда при низкоинтенсивной циклической физической нагрузке, а также отсутствие положительных сдвигов гемореологического статуса и показателя дос­тавки кислорода к тканям в этих условиях послужили основанием для включения в это исследование ЭЭСР, обладающих гемореологическим [Плотников М.Б. и др., 1999], адаптогенным [Володин В.В., 2003] и актопротекторным [Сальник Б.Ю., 1966] свойствами.

Ежедневная дозированная физическая нагрузка, предъявляемая крысам с ин­фарктом миокарда, получавшим ЭЭСР приводила к улучшению, в основном пока­зателей клеточной реологии. Отмечалось статистически значимое увеличение по­лупериода агрегации эритроцитов, что свидетельствует об ослаблении эритроци- тарной агрегации; этот показатель достигал значений близких к таковым у интакт­ных животных. Низкоинтенсивная физическая нагрузка, предъявляемая крысам синфарктом миокарда способствовала увеличению деформируемости эритроцитов по сравнению с контролем и значительному снижению вязкости крови, достигав­шей значений, близких к норме. Выявлено существенное восстановление до уров­ня интактных животных значений коэффициента доставки кислорода к тканям в диапазоне высоких скоростей сдвига, характерных для микроциркуляторного русла. Возможно, вследствие восстановления доставки кислорода к тканям в ор­ганизме животных с инфарктом миокарда, получавшим ЭЭСР совместно с физи­ческими нагрузками не происходило усиление анаэробных процессов.

Таким образом, дозированная физическая нагрузка у крыс с инфарктом мио­карда, получавших ЭЭСР, сопровождалась улучшением гемореологических пока­зателей, о чем свидетельствуют более выраженное снижение вязкости крови во всем исследуемом диапазоне скоростей сдвига, значительное уменьшение агрега­ции и улучшение деформируемости эритроцитов в сравнении со значениями в группе крыс без физической нагрузки. Улучшение гемореологического статуса под влиянием ЭЭСР благоприятно отражалось на значениях показателя доставки кислорода к тканям. Кроме этого, курсовое введение исследуемых экстрактов со­провождалось положительными сдвигами углеводного обмена – снижением уров­ня молочной и пирориноградной кислот в крови.

Результаты проведенных исследований совместного применения ЭЭСР и низкоинтенсивных дозированных физических нагрузок на тредмиле у животных с инфарктом миокарда позволяют рассматривать данную комбинацию воздействий как перспективный подход в реабилитационной терапии постинфарктных состоя­ний.

Обобщая результаты выполненных исследований можно заключить, что формирование СПВК при различных патологических состояниях может иметь свои особенности, однако механизмы возникновения гемореологических наруше­ний схожи. Повышение гематокрита при острых нарушениях коронарного и це­ребрального кровообращения обусловлено возросшей потребностью пораженных тканей в кислороде [Мчедлишвили Г.И., 1982; Гурвич A.M., Мутускина Е.А., 1984]. Увеличение концентрации фибриногена и грубодисперсных белков плазмы при артериальной гипертензии диктуется необходимостью устранения риска ге- моррагий, возможных вследствие повышения проницаемости сосудистой стенки, вызванного развитием лактацидоза и усилением процессов ПОЛ [Орлов С.Н. и др., 1984; Лебедева Н.В., Ибрагимова Л.Н., 1987]. Формирование СПВК тесно связано с другими системами, предназначенными поддерживать необходимую те­кучесть крови. Например, при повышении вязкости крови увеличивается скорость сдвига на стенке сосуда, что может привести к изменению функциональной ак­тивности эндотелиальных клеток, высвобождению вазоактивных веществ, акти­вации системы гемостаза [КетИаЛ \¥\Н., 1995]. Повышение агрегации и снижение деформируемости эритроцитов рассматриваются как следствие мембранных на­рушений, возникающих в результате изменений белкового состава и фосфоли- пидного спектра мембран красных клеток, а также по причине снижения активно­сти мембранных ферментов, нарушений ионного гомеостаза и изменения дзета- потенциала [Габриэлян Э.С., Акопов С.Э., 1985]. Гемореологические нарушения при различных моделях СПВК являются основой для развития расстройств мик­роциркуляции и возникновения ишемии тканей, приводя, в конечном итоге к на­рушению функционирования органов [Левтов В.А. и др., 1982]. Влияние на рео­логические свойства крови могут быть резервом улучшения микроциркуляции и повышения устойчивости к воздействию интенсивных физических нагрузок. Од­ним их подходов к использованию «гемореологического резерва» является при­менение средств, обладающих гемореологической активностью. Исходя из полу­ченных данных относительно гемореологической активности ЭЭСР в условиях различных моделей патологических состояний, можно сделать вывод, что основ­ным механизмом ослабления СПВК является влияние исследуемых препаратов на свойства и функции эритроцитов. При оценке системы реологии крови это прояв­ляется в положительном воздействии ЭЭСР на процессы деформируемости и аг­регации эритроцитов. Вполне очевидно, что в основе процессов деформируемости и агрегации эритроцитов лежат молекулярные механизмы: состояние липидного спектра мембран эритроцитов, интенсивность энергопродукции в клетке, ионный гомеостаз, межклеточные взаимодействия.

Реологические свойства крови являются функциональной системой регули­рующей состояние гемодинамики и гемостаза. Именно реологические свойства крови являются тем фактором, который поддерживает обратимость и относитель­ное термодинамическое равновесие систем гемодинамики и гемостаза с наимень­шей продукцией энтропии. При нарушении реологических свойств крови воз­можно возрастание меры неупорядоченности системы с реализацией различных вариантов, характеризующихся определенной степенью необратимости процесса, для гемодинамики – нарушение микроциркуляции, гипоксия, ишемия; для гемо­стаза – гиперкоагуляционный синдром, тромбоз, ДВС-синдром. Существует кон­цепция о «гемореологическом синдроме» [Фирсов H.H., Джанашия П.Х., 2008] подразумевающем единство взаимосвязанных процессов, в котором ключевыми элементами являются реологические свойства крови, генерализация микроцирку- ляторных нарушений (сладж-эффект) и ДВС-синдром. Гемореологические нару­шения, характеризующиеся, в первую очередь повышением вязкости крови, при­водят к росту сдвиговых усилий в пристеночной области сосуда, что создает ус­ловия для активации факторов свертывания [Reinhart W.H., 1995]. Повышение аг­регации эритроцитов, как один из основных микрореологических параметров приводит к закономерному увеличению коагуляционного потенциала крови [Аш- кенази И.Я., 1978]. Нарушения белкового состава плазмы (снижение альбумин- глобулинового и альбумин-фибриногенового коэффициентов) характеризуются повышенной сорбцией грубодисперсных белков на поверхности раздела фаз – мембране эритроцита и приводят к резкому усилению когезионных сил между клетками, их агрегации и генерализованному нарушению микроциркуляции [Лев- тов В.А. и др., 1982]. Ухудшение деформируемости эритроцитов представляется весьма важным фактором, поскольку увеличение числа ригидных эритроцитов в условиях повышения напряжения сдвига может, с одной стороны, способствовать выбросу из красных клеток стимулятора агрегации тромбоцитов – АДФ, с другой, оказывать повреждающее действие на эндотелий сосудов, особенно в зоне микро- гемоциркуляции [Фирсов H.H., Джанашия П.Х., 2008]. Помимо непосредственной активации гиперкоагуляции крови при нарушении ее реологических свойств во время ДВС-синдрома наблюдается массированное повреждение мембран эритро­цитов, что приводит к потере способности эритроцитов деформироваться и про­ходить через микроциркуляторное русло, что в конечном итоге способствует на­рушению процессов перфузии и оксигенации тканей [Левтов В.А. и др., 1982]. Необходимо отметить, что наиболее тесно взаимосвязь гемореологии и гемостаза проявляется в зоне микроциркуляции, где капиллярная сеть лишена сократитель­ных элементов и вазомоторной иннервации [Соловьева Т.И. и др., 2006]. В усло­виях микроциркуляторного русла только улучшение реологических свойств крови может служить механизмом, определяющим интенсивность кровообращения [Pries A.R., Secomb T.W., 2003].

Генерализованные нарушения микроциркуляции органов, как проявление «гемореологического синдрома» приводят к срыву компенсаторных и адаптаци­онных возможностей организма, повышая неупорядоченность системы жизне­обеспечения в целом.

В условиях патологических состояний, сопровождающихся СПВК, происхо­дит нарушение механизмов регуляции жидкого состояния крови, сдвиги в равно­весии между функциональной активностью клеток крови, тромборезистентностью эндотелия сосудистой стенки, прокоагуляционной, антикоагуляционной и фибри- нолитической активностью крови [Сыркин А.Л., 1998; Танашян М.М., 2007]. Из­менения коагуляционного потенциала крови при сердечно-сосудистых заболева­ниях происходит параллельно с ухудшением реологических свойств крови при взаимном потенциировании эффектов, приводящих, в конечном итоге, к механи­ческой обструкции микроциркуляторного русла [Габриелян Э.С., Акопов С.Э., 1985]. Нарушения микроциркуляции, происходящие вследствие образования тромбоцитарных агрегатов и тромбов являются существенным моментом в пато­генезе и прогрессировании ишемической болезни сердца и инфаркта миокарда, при нарушениях мозгового кровообращения и артериальной гипертензии [Габ­риелян Э.С., Акопов С.Э., 1985; Горбачева Ф.Е. и др., 1994; Ощепкова Е.В. и др., 2000; Сопина Н.В., 1990].

В процессе свертывания крови наблюдается комплекс взаимодействий плаз­менных и тромбоцитарных факторов свертывания. Одним из главных элементов в процессе свертывания крови является экспонирование тромбогенной фосфоли- пидной поверхности тромбоцитов после их активации. Фосфолипиды мембран, как тромбоцитов, так и эритроцитов, распределены ассиметрично с преобладани­ем в наружном листке бислоя клеток, контактирующих с кровью, в основном фосфатидилхолина и сфингомиелина, во внутреннем – фосфатидилсерина и фос- фатидилэтаноламина. Такое распределение фосфолипидов определяет естествен­ную атромбогенность клеток крови, т.е. неспособность инициировать свертыва­ние крови. Для участия тромбоцитов в свертывании крови необходимо нарушение исходной ассиметрии фосфолипидного состава их мембран [Зубаиров Д.М., 2000; Литвинов Р.И., 2004]. Поступление Ca в тромбоцит выключает механизм под­держивания ассиметрии фосфолипидного состава. Свертывание крови, начатое по внешнему пути и продуцирующее лишь небольшое количество тромбина, резко усиливается по механизмам обратной связи, как только фосфатидилсерин, поляр­ная головка которого несет два отрицательных заряда и только один положитель­ный, появляется на наружной поверхности активированных тромбоцитов [Духа­нин A.C., Губаева Ф.Р., 1998; Зубаиров Д.М., 2000].

Возможность фармакологического воздействия на фосфолипидный состав мембран тромбоцитов, обеспечивающего сохранность их количественного и каче­ственного состава, ассиметричность распределения фосфолипидов в наружном и внутреннем слоях мембран, может рассматриваться как перспективный подход к уменьшению коагуляционного потенциала крови.

Проявление «гемореологического синдрома» характеризуется изменением показателей свертывающей системы крови при сердечно-сосудистых заболевани­ях: ишемии головного мозга, инфаркте миокарда, артериальной гипертензии.

Гемостазиологические расстройства являются важным элементом в патогене­зе ишемии головного мозга [Горбачева Ф.Е. и др., 1994; Sato M., Ohshima N., 1986; Ernst E. et al., 1988]. Дисфункция в системе гемостаза в виде рассогласова­ния процессов свертывания крови и фибринолиза возникает как патогенетическая предпосылка микроциркуляторных расстройств еще на доклинической стадии це- реброваскулярной патологии, являясь индикатором снижения функциональных резервов. Экспериментальное моделирование и данные клинической патофизио­логии ишемического инсульта прямо определяют ведущую роль изменений функ­ционально-морфологических показателей сосудисто-тромбоцитарного звена ге­мостаза в развитии этого заболевания [Белоусов Ю.Б., 2003; Пряникова H.A. и др., 2003].

При нарушении мозгового кровообращения ишемического характера выяв­лена однонаправленность изменений агрегационной активности тромбоцитов в сторону ее увеличения [Высоцкая В.Г. и др., 1982; Камчатнов П.Р. и др., 1998]. Кроме того, отмечено снижение способности кровяных пластинок к дезагрегации [Танадшн М.М., Ионова В.Г., 2003; Ernst Е. et al., 1988]. Это может иметь особое значение в развитии дисциркуляции, поскольку повышение прочности образую­щихся в кровотоке тромбоцитарных агрегатов увеличивает опасность развития эмболии микрососудов. У большинства больных с ишемией головного мозга име­лась тенденция к активации функции тромбоцитов под влиянием АДФ и адрена­лина [Танашян М.М., Ионова В.Г., 2003].

Существенное увеличение числа циркулирующих тромбоцитарных агрегатов при цереброваскулярной ишемии коррелирует со степенью тяжести заболевания. Проведенные исследования установили, что изменяется характер воздействия PGEi„и PGF_2a на кровяные пластинки в сторону преобладания проагрегантного эффекта [Айвазян А.Г., 1980]. Повышение функциональной активности тромбо­цитов у этой категории больных, вероятно, связано как с изменениями чувстви­тельности кровяных пластинок к действию простагландинов, так и со снижением антиагрегационной активности сосудистой стенки.

Определенную роль в модификации тромбоцитарных реакций при сосуди­стых заболеваниях мозга играют процессы ПОЛ [Григорова И.А., 2003; Ланкин В.З. и др., 2000]. Активация цикла арахидоновой кислоты, являющейся одним из продуктов деградации фосфолипидов клеточных мембран, вызывает накопление вторичных ее продуктов – циклических эндопероксидов, продукты превращения которых способствуют агрегации форменных элементов крови и вазоконстрик- ции. Вследствие распада фосфолипидов образуется также фактор активации тромбоцитов [Бышевский Л.Ш. и др., 2000; Гусев Е.И. и др., 1999; Choi D.W., 1995]. Вследствие свободнорадикальной атаки ингибируется плазменный анти­тромбин, в результате чего повышается количество и активность продуцируемого тромбина [Асейчев A.B., Азизова O.A., 2004].

При развитии недостаточности кровоснабжения мозга снижается функция естественных антикоагулянтов: понижен уровень протеина S и протеина С, анти­тромбина III. Наблюдается замедление времени лизиса эуглобулинового сгустка и уменьшение фибринолитической активности эуглобулиновой фракции, что отра­жает снижение фибринолитического потенциала плазмы крови [Гусев Е.И. и др., 1999; Танашян М.М., Ионова В.Г., 2003]. В острый период инсульта отмечены снижение синтеза плазминогена, t-PA [Танашян М.М., Ионова В.Г., 2003]. Акти­вация тромбоцитов, четкий рост маркеров фибринообразования – D-димера и рас­творимых комплексов фибрин-мономеров характеризует наличие интенсивных процессов внутрисосудистого тромбообразования и формирование мономеров фибрина [Танашян М.М., Ионова В.Г., 2003].

Результаты исследований коагуляционного гемостаза при ишемии головного мозга методом тромбоэластографии свидетельствуют о наличии гиперкоагуляции, обусловленной в основном стрессорной реакцией системы гемостаза на развив­шейся инсульт и тканевую гипоксию. Возникающая уже на ранних стадиях забо­левания активация фибринолиза, в значительной степени связанная с выбросом тромбопластина из очагов ишемизированной ткани, носит компенсаторный ха­рактер [Камчатнов П.Р. и др., 1998]. Чем тяжелее поражение мозга, тем более вы­ражены изменения деструктивного характера, обеспечивающие массивное посту­пление в кровоток из ишемизированной ткани мозга высокоактивных биологиче­ских субстанций [Григорова И.А., 2003]. В частности, многократно возрастающие в острейшей фазе инсульта концентрации ТхА₂ и катехоламинов, среди которых резко преобладает содержание норадреналина, оказывают проагрегантное влия­ние как в зоне очагового поражения, так и в общей системе кровообращения, что ведет за собой истощение атромбогенного потенциала сосудистой системы в це­лом. Кроме того, ТхА₂ и норадреналин ухудшают деформационные свойства эритрЪцитов, а высокие концентрации фибриногена потенциируют образование эритроцитарных агрегатов и препятствуют эффективному лизису образующихся тромбов [Высоцкая В.Г. и др., 1982].

Указанные изменения гемореологических детерминант (агрегации и дефор­мируемости эритроцитов) повышают вязкостные характеристики крови как при низких, так и при высоких скоростях сдвига, тем самым предопределяя ухудше­ние реологии крови в микроциркуляторном участке кровообращения при ишемии головного мозга. Увеличение вязкости крови в этих случаях обусловлено резким повышением агрегационной активности эритроцитов и тромбоцитов, развиваю­щимся на фоне дисфункции эндотелия, что приводит к уменьшению образования простациклина и, как следствие, снижению его антикоагулянтного потенциала [Ионова В.Г., Суслина З.А., 2002; Sato М., Ohshima N., 1986]. С точки зрения мик­роциркуляции, кроме непосредственно сосудистых эффектов большое значение придается системе L-аргинин – оксид азота, которая регулирует процессы arpera­ции и адгезии тромбоцитов. В отличие от простациклина, продуцируемого эндо­телием, N0 обладает таким же эффектом, синтезируясь не только в эндотелиоци- тах, но и в самих тромбоцитах, сдерживая проагрегационное действие тромбокса- на А2, осуществляя тем самым саморегуляцию тромбоцитами собственной актив­ности [Moneada S., Higgs А., 1993; Knowels Р., Moneada S., 1994].

Таким образом, одним из основных патогенетических механизмов, опреде­ляющих возникновение и прогрессирование ишемических церебральных рас­стройств, являются нарушения в системе гемокоагуляции. Пусковым звеном в этом процессе являются тромбоциты, ранее других компонентов гемостаза реаги­рующие на инициирующие воздействия [Горбачева Ф.Е. и др., 1994; Ясиманова А.Н. и др., 2003; Ernst Е. et al., 1988; Sato М., Ohshima N., 1986].

В результате проведенных нами экспериментов установлено, что на 5-е сутки после моделирования ишемии головного мозга у крыс Вистар наблюдалось зна­чительное возрастание агрегационной способности кровяных пластинок. Агрега­ция тромбоцитов, индуцированная АДФ, увеличивалась в 2 раза по сравнению с интактными животными.

Однонаправленность изменений агрегационной активности тромбоцитов в сторону ее увеличения выявлены во многих исследованиях как у животных с экс­периментальной ишемией мозга, так и у больных с инсультом [Высоцкая В.Г. и др, 1982; Камчатнов П.Р. и др, 1998; Танашян М.М. др, 2001; Ernst Е. et al, 1988]. Известно, что при нарушениях мозгового кровообращения, формирующих­ся на фоне атеросклероза магистральных сосудов, общим механизмом гиперагре­гации тромбоцитов и атеротромбогенеза является нарушение геометрии потока крови в области атеросклеротической бляшки, которая способствует возникнове­нию очагов турбулентности с зонами высоких скоростей сдвига, где происходит активация тромбоцитов с последующей их агрегацией [Ионова В.Г, Суслина З.А, 2002; Танашян М.М. и др, 2001; O’Brien J.R, 1990]. Нарушения тромбоцитарно- сосудистого звена гемокоагуляции характеризуют нарастание тромбогенного по­тенциала крови при инсульте и инициируют коагуляционное звено гемостаза [Ба- луда В.П. и др, 1995; Кухтевич И.И, 1998; Суслина З.А, 2000]. Кроме того, в острой фазе инсульта проагрегантное действие оказывает массивное поступление катехоламинов из ишемизированной ткани мозга [Ионова В.Г, Суслина З.А, 2002]. На фоне истощения атромбогенных эндотелиальных резервов [Акопов С.Э, 1982; Farconi S, 2004] снижается способность кровяных пластинок к дезаг­регации, повышается прочность образующихся в кровотоке тромбоцитарных аг­регатов [Танашян М.М. и др, 2001].

Нарушения гемокоагуляции, антикоагуляционной и фибринолитической ак­тивности свертывающей системы крови при цереброваскулярной патологии весь­ма распространены [Гусев Е.И. и др, 1999; Танашян М.М. и др, 2001; Широков Е.А., 2003].

В наших исследованиях на 5-сутки после перевязки сонных артерий у крыс отмечено повышение гемокоагуляции, которое выражалось достоверным умень­шением, по сравнению с интактными животными протромбинового времени и продолжительности свертывания. Вместе с тем, значения других параметров коа- гулограммы (Ti и Т₃) и АЧТВ не достигали уровня достоверных различий в срав­нении с интактными значениями. Дополнительным фактором повышения коагу- ляционного потенциала крови может быть рост уровня фибриногена, который был зафиксирован в исследованиях на аналогичной модели ишемии мозга у крыс [Плотников М.Б. и др., 1998]. Такие же изменения отмечены у больных с наруше­ниями мозгового кровообращения [Ионова В.Г., Суслина З.А., 2002].

В отдельной серии экспериментов в условиях in vitro с помощью турбиди- метрического метода был оценен процесс образования фибринового сгустка в плазме крови, взятой у крыс с ишемией головного мозга. Время образования рас­творимого фибрин-полимера было достоверно снижено и более чем в 2 раза воз­растала максимальная скорость свертывания крови крыс с ишемией головного мозга в сравнении со значениями у интактных крыс.

Таким образом, в условиях модели ишемии головного мозга у крыс выявлена гиперагрегация тромбоцитов наряду с активацией коагуляционного звена гемо­стаза.

Отмеченные нами изменения гемостаза у животных с ишемией головного мозга аналогичны таковым у больных с инсультом [Ионова В.Г., Суслина З.А., 2002; Суслина З.А., 2000; Танашян М.М. др., 2001; Широков Е.А., 2003], что под­тверждает адекватность модели и возможность использования ее для доклиниче­ских исследований средств, влияющих на гемостаз.

Курсовое введение ЭЭСР приводило к достоверному снижению агрегации тромбоцитов, уменьшению коагуляционного потенциала крови, что проявлялось увеличением времени начала, продолжительности и конца свертывания крови. В опытах in vitro максимальная скорость свертывания, инициированная тромбином, после преинкубации с исследуемыми экстрактами снижалась более чем в 2 раза, по сравнению с крысами не получавшими лечения. Время образования раствори­мого фибрин-полимера имело тенденцию к возрастанию и, в отличие от кон­трольных животных, достоверно не отличались от такового у интактных крыс.

Анализируя механизмы антитромбоцитарного действия исследуемых экс­трактов, следует учитывать их выраженную гемореологическую активность, об­наруженную на модели ишемии головного мозга в проведенных нами исследова­ниях. Нарушение функциональной активности эритроцитов и тромбоцитов имеют „динамическую составляющую”, обусловленную нарушением клеточных взаимо­отношений в потоке крови. Повышенная агрегируемость эритроцитов приводит к вытеснению тромбоцитов из осевой части потока на периферию, в пристеночную область, в зону высоких скоростей сдвига, где происходит их разрушение и акти­вация тромбоцитарного звена свертывающей системы крови [Reinhart W.H. 1995]. При ишемии головного мозга у крыс при курсовом введении ЭЭСР ослабление агрегации эритроцитов и улучшение их деформируемости приводит к повышению стабильности клеток крови, что, вероятно препятствует выходу биологически ак­тивных веществ проагрегантного и прокоагулянтного действия.

Модулируемая в наших экспериментах ишемия головного мозга протекает на фоне ярко выраженного оксидативного стресса [Биленко М.В., 1989]. Установле­но наличие у ЭЭСР антиокислительных и антирадикальных свойств, связанное как с присутствием в их составе полифенольных соединений и фитоэкдистерои- дов [Плотников М.Б. и др., 1998]. Флавоноиды снижают образование и/или осво­бождение свободных радикалов макрофагами, предотвращают окисление липо- протеинов низкой плотности [Шкарина Е.И., 2001; Потапович А.И., Костюк В.А., 2003; Huguest A.I. et al., 1990]. Фитоэкдистероиды, оказывая влияние на фосфоли- пидный состав мембран, проявляют свойства структурных антиоксидантов [Сы­ров В.Н., 1994]. Вероятно, снижая интенсивность ПОЛ в мембранах клеток крови, исследуемые экстракты оказывают положительное влияние на состояние тромбо­цитарного гемостаза и, как следствие, коагуляционного гемостаза.

Поскольку ЭЭСР при их инкубации с плазмой крови, полученной у крыс с ишемией головного мозга, замедляли скорость свертывания и способствовали по­вышению времени образования фибринового сгустка при добавлении в пробу тромбина, есть все основания считать, что одним из механизмов антикоагулянт- ного действия исследуемых экстрактов является их способность ингибировать тромбин. Этот эффект экдистероидсодержащих экстрактов не является прямым, поскольку было установлено, что преинкубация тромбина с исследуемыми экс­трактами не приводила к снижению его коагуляционной активности.

Таким образом, ЭЭСР обладают способностью уменьшать тромбогенный по­тенциал крови у крыс с ишемией головного мозга за счет снижения агрегацион- ной активности тромбоцитов и уменьшения коагуляционных свойств крови.

Острое и хроническое коронарогенное поражение миокарда сопровождается серьезными и длительными нарушениями свертывающей системы крови [Пан- ченко В.М., Добровольский А.Б., 1996; Сопина Н.В., 1990; Тепляков А.Т., Гарга- неева A.A., 2001]. Тромбоз коронарных артерий, ведущий к инфаркту миокарда, одна из основных причин смертности от сердечно-сосудистых заболеваний [Goode G.K. et al., 1995]. Важное значение в патогенезе инфаркта миокарда и ишемической болезни сердца (ИБС) придается взаимосвязи гемодинамических и гемореологических характеристик, состоянию сосудистой стенки, их взаимовлия­нию и воздействию на клеточное звено гемостаза [Жаров Е.И. и др., 1991; Соко­лов Е.И., 2000]. В генезе микроциркуляторной недостаточности и тромбообразо- вания при ИБС весьма значимым является состояния эндотелия. Эндотелий теря­ет способность синтезировать антитромботические противосвертывающие и фиб- ринолитические агенты, инактивировать прокоагулянтные вещества, метаболизи- ровать биологически активные соединения, влияющие на систему гемостаза и стенку кровеносных сосудов [Тепляков А.Т., Гарганеева A.A., 2001; Munkvad S. et al., 1990; Menashi S.et al., 1991; Meredith J.T. et al., 1993].

Большинство исследователей отмечали y больных инфарктом миокарда и в экспериментах на животных увеличение коагуляционного потенциала крови и ак­тивацию плазменных факторов свертываемости [Flores N.A., Sheridan D.J., 1990].

Это объясняют повышением активности симпатоадреналовой системы, увеличением выброса в кровь кортикостероидов, гистамина, кининов и других биологи­чески активных веществ, которые влияют на функцию тромбоцитов и плазменных факторов свертывания [Мягков И.И. и др., 1985; Сыркин A.JL, 1998].

У больных инфарктом миокарда наблюдали уменьшение содержания в плаз­ме продуктов деградации фибрина, оказывающих антикоагулянтное действие че­рез конкурентное торможение функции тромбина и превращения фибриногена в фибрин. Это свидетельствует о недостаточности фибринолитической реакции плазмина. У этих больных также происходило угнетение фибринолиза, торможе­ние противосвертывающей системы крови за счет повышения антиплазминовой активности [Пономарева А.Г. и др., 1981; Jonson О. et al., 1984].

Имеются данные о снижении антикоагулянтной активности крови при ИБС, связанной с уменьшением уровня антитромбина III и гепарина [Соколов Е.И., 2000]. Гиперкоагуляционный сдвиг, наблюдаемый у больных ИБС и наиболее вы­раженный при инфаркте миокарда, нельзя объяснить только повышением актив­ности плазменных факторов и угнетением фибринолиза. Нарушения функцио­нального состояния тромбоцитов, проявляются раньше, чем нарушения в плаз­менном звене гемостаза. Хотя активация и адгезия тромбоцитов при ИБС рас­сматриваются как “физиологический” ответ на внезапное повреждение или раз­рыв атеросклеротической бляшки, направленный на восстановление ее целостно­сти, неконтролируемое прогрессирование этого процесса приводит к формирова­нию тромба внутри сосуда с окклюзией последнего и развитием транзиторной ишемии или инфаркта [Карпов Ю.А., 2004].

Патофизиологической основой изменения агрегации тромбоцитов при ИБС и инфаркте миокарда является уменьшение содержания цАМФ в клетке [Люсов В.А., Савчук В.И., 1991]. Именно высокий уровень цАМФ препятствует актива­ции тромбоцитов благодаря ингибированию фосфолипазы А₂ [Doni M.J. et al., 1988; Dom M.J. et al., 1994], снижению цитоплазматического Ca в клетке [Doni M.J. et al., 1994], активации Са²⁺ЛУ^²⁺-АТФ-азы [Johansson J.S. et al., 1992]. Уста­новлено, что уровень цАМФ в тромбоцитах здоровых людей составляет 4,1 о  моль/3*10 клеток и снижается при ИБС до 3,0 пмоль/3><10 клеток [Соколов Е.И., 2000].

В литературе имеются данные о корреляционной взаимосвязи между агрегационной способностью тромбоцитов и характером клинического проявления, а также исхода инфаркта миокарда. С повышением степени агрегации тромбоцитов увеличиваются показатель суммарного снижения сегмента ST на ЭКГ и площадь субэндокардиального повреждения миокарда [Жаров Е.И. и др., 1991]. В первые часы заболевания наблюдается повышение функциональной активности тромбо­цитов, увеличение их числа, активности фактора 3. В остром периоде инфаркта миокарда отмечено высокое содержание гликогена и АДФ в тромбоцитах, что ле­жит в основе усиления их адгезивности и разрушаемости. Появляются ультра­структурные изменения – резкая деформация, образование псевдоподий, увеличе­ние их числа, повышение числа а-гранул, опустошение и уменьшение серотони- новых гранул, увеличение гранул гликогена. Агрегация тромбоцитов при этом усиливается, ускоряется и становится необратимой [Атаханова J1.3. и др., 1991; Захария Е.А., Темник И.В., 1987].

В мембранах а-гранул тромбоцитов, наряду с широким спектром других биологически активных веществ, содержится специфический белок Р-селектин – рецептор клеточной адгезии, наличие которого на плазмолемме кровяных пласти­нок используется как маркер активации тромбоцитов. При дегрануляции тромбо­цитов, высвобождающийся Р-селектин встраивается в плазмалемму и служит ре­цептором адгезии клеток крови и эндотелиоцитов [Маклецова С.А., Галявич A.C., 2003]. Экспрессивность Р-селектина на поверхности тромбоцитов повышалась как у больных ИБС, так и при инфаркте миокарда [Hollander J.E. et al., 1999]. При на­растании тяжести течения ИБС, выраженности клинических проявлений увеличи­вается интенсивность липидных свободнорадикальных процессов и снижается ан- типерекисная резистентность плазмы [Рехвиашвили М.В. др., 2001], что также приводит к увеличению агрегации тромбоцитов [Aviram M., 1989], синтезу инги­битора активатора плазминогена [Boulanger С.М. et. al., 1992].

Наблюдаемая на ранних сроках инфаркта миокарда гиперагрегация тромбо­цитов вызвана общей стрессовой реакцией организма, увеличенным содержанием катехоламинов, других биологически активных веществ, попадающих в кровяное русло из зоны некроза (тканевый тромбопластин, АДФ, липиды) [Cameron H., Ardlie N., 1982]. На 7-10 дни после начала заболевания проявляется вторая волна гиперагрегации, вызванная циркулирующими в крови продуктами деструкции миокарда, накоплением в мембране тромбоцитов липидов [Ботолова E.H. и др., 1985;*Тулабаева Г.М. и др., 2002]. Одним из механизмов гиперактивности тром­боцитов является снижение их чувствительности к простациклину, особенно вы­раженное в острый период [Uchida Y. et al., 1986]. Обнаружение рецепторов к простациклину (IP-рецепторы), локализованных в основном на гладкомышечных клетках сосудов и тромбоцитах [Colman R.A. et al., 1994], подтверждает наблю­даемую ранее модуляцию простациклином функциональной активности этих кле­ток [Gryglewski R.J., 1990; Gryglewski R.J., 1993]. Угнетая мобилизацию специфи­ческих связывающих участков для фибриногена на поверхности тромбоцитов, простациклин тормозит АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов [Кузник Б.И. и др., 1989]. У больных ИБС уровень простациклина снижен в 1,3 раза по сравнению со здоровыми лицами [Соколов Е.И., 2000]. Повышение агрегацион- ных свойств тромбоцитов и снижение их чувствительности к простациклину предполагает неадекватное кровоснабжение периинфарктной и инфарктной зон миокарда. При повторных случаях инфаркта миокарда наблюдается усугубление гиперкоагуляции и гиперагрегации [Панченко В.М. и др., 1991]. Тромбоциты во время агрегации выбрасывают значительное количество ТхА₂, АДФ, серотонина, (3-тромбоглобулина, что приводит к их дальнейшей агрегации, констрикции коро­нарных артерий [Сыркин A.JL, 1998; Trip M.D. et al., 1990]. Это, в конечном итоге, вызывает ухудшение кровоснабжения миокарда. Ишемия миокарда, ацидоз, по­вышение содержания ионов калия в межклеточной жидкости, недостаток кисло­рода, отек в свою очередь активируют образование ТхА₂, тормозят синтез проста­циклина и создают условия для вторичного спазма, расширения зон инфаркта, развития осложнений [Балуда М.В. и др., 1990; Гиоргадзе МЛ. и др., 1991; Кино- шенко Е.И., 1997].

Таким образом, важнейшими патогенетическими механизмами развития ИБС, инфаркта миокарда и его осложнений в раннем периоде являются наруше­ния в системе гемостаза, коррекция которых является важным звеном патогенети­ческой терапии, приводящей к восстановлению артериальной проходимости, улучшению микроциркуляции в периинфарктной зоне.

В наших исследованиях на 5-е сутки после создания модели инфаркта мио­карда у крыс Вистар наблюдалось достоверное повышение АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов. Повышение функциональной активности тромбоцитов в ранние сроки инфаркта миокарда отмечено многими авторами в экспериментах на животных и в клинических исследованиях [Захария Е.А., Темник И.В., 1987; Ата- ханова J1.3. и др., 1991; Соколов Е.И., 2000; Schulman S.P., 2004]. Полагают, что гиперагрегация тромбоцитов в этот период обусловлена повышением активности симпатоадреналовой системы, увеличением содержания в крови АДФ, тканевого тромбопластина [Мягков И.И. и др., 1985; Сыркин А.Л., 1998; Cameron H., Ardlie N., 1982], снижением чувствительности кровяных пластинок к простациклину [Панченко В.М. и др., 1991; Uchida Y. et al., 1986]. В более поздние сроки разви­тия инфаркта миокарда гиперактивность тромбоцитов поддерживается циркули­рующими в крови продуктами деструкции миокарда, нарушением ассиметрии ли- пидов в мембранах тромбоцитов [Ботолова E.H. и др., 1985; Тулабаева Г.М. и др., 2002]. Повышение агрегации тромбоцитов приводит к выбросу значительных ко­личеств тромбоксана, серотонина, АДФ, ß-тромбоглобулина, создавая условия для вторичного спазма коронарных сосудов и расширения зон инфаркта [Панчен­ко В.М. и др., 1991].

При инфаркте миокарда и у больных ишемической болезнью сердца наблю­даются также нарушения плазменного гемостаза различной степени выраженно­сти, отмечено повышение активности плазменных факторов свертывания крови, нарушение процессов фибринолиза [Тепляков А.Т., Гарганеева A.A., 2001; Flores N.A., Sheridan D.J., 1990; Jonson О. et al., 1984]. Наиболее выраженные изменения со значительной активацией прокоагулянтных факторов, снижением на 20-40% активности физиологических антикоагулянтов отмечаются у больных с неста­бильной стенокардией и в постинфарктном периоде [Самсонова H.H., Самуилова Д.М., 2002].

Нарушения микроциркуляции вследствие образования тромбоцитарных агре­гатов и тромбов в местах стенозов коронарных артерий являются важными фак­торами патогенеза ишемической болезни сердца и инфаркта миокарда [Сопина Н.В., 1990; Сыркин А.Л., 1998; Goode G.K. et al., 1995]. Установлено, что агрегат­ное состояние крови коррелирует с выраженностью нарушений коронарного кро­вотока. Это обусловлено как окклюзией коронарных артерий тромбоцитарными агрегатами [Жаров Е.И. и др, 1991; Тулабаева Г.М. и др, 2002], так и высвобож­дением из активированных кровяных пластинок биологически активных веществ: тромбоксана, АДФ, серотонина, (3-тромбоглобулина, вызывающих вазоконстрик- цию и дальнейшую агрегацию тромбоцитов [Сыркин A.JI, 1998; Trip M.D. et al, 1990].

В наших исследованиях на 5-е сутки после перевязки коронарной артерии также зарегистрировано изменение показателей, характеризующих плазменный гемостаз. Так, у крыс с инфарктом миокарда было снижено время начала, про­должительности и конца свертывания. Протромбиновое время достоверно уменьшалось у крыс с инфарктом миокарда в сравнении со значением у интакт­ных животных. Полученные данные свидетельствуют о повышение активности плазменного гемостаза в условиях воспроизведенного инфаркта миокарда у крыс. Повышение активности плазменных факторов свертывания вместе с гиперагрега­цией тромбоцитов, в условиях использования нами модели инфаркта миокарда, свидетельствуют об однонаправленности наблюдаемых изменений с динамикой коагуляционного потенциала крови больных инфарктом миокарда [Hetland О. et al, 1997; Toschi V. et al, 1997]. У крыс в условиях модели инфаркта миокарда раз­вивалась выраженная гиперфибриногенемия: содержание фибриногена в плазме через’сутки в 2,4 раза превышало нормальный уровень и оставалось повышенным в 1,5-1,6 раза спустя 5 и 7 суток после перевязки коронарной артерии [Алиев О.И, 2004]. Рост уровня фибриногена наблюдался также и у больных с острым и хроническим коронарогенным поражением миокарда [Жаров Е.И. и др, 1991; Сыркин A.JI, 1998]. В свою очередь повышение фибриногена в плазме крови у крыс с моделью инфаркта миокарда коррелирует с ростом вязкости крови [Алиев О.И, 2004], что является одной из главных причин нарушения реологических свойств крови, играющих важную роль в прогрессировании этого заболевания [Handa К. et al, 1989; Ernst Е, 1996].

Таким образом, воспроизведенная модель инфаркта миокарда у крыс сопро­вождается изменениями тромбоцитарно-сосудистого и плазменного звеньев гемо­стаза, которые проявляются повышением агрегационных и коагуляционных свойств крови.

Курсовое применение ЭЭСР приводило к выраженному снижению агрегации тромбоцитов у крыс с инфарктом миокарда. Характеризуя выявленное нами анти- агрегантное действие ЭЭСР, следует учитывать наличие в механизме этого эф­фекта такого косвенного фактора, как способность фитоэкдистероидов, входящих в их состав, оказывать в условиях патологии нормализующее действие на фрак­ционный состав мембран. Это действие экдистероидов проявляется в различных органах, в частности, в мембранах митохондрий печени при экспериментальном сахарном диабете [Сыров В.Н., 1994], в мембранах эритроцитов на моделях ин­фаркта миокарда и ишемии мозга [Алиев О.И., 2004]. В наших исследованиях ЭЭСР нормализовывали липидный состав мембран эритроцитов в условиях моде­лей сердечно-сосудистых заболеваний и сахарного диабета. Мы предполагаем, что положительное влияние ЭЭСР на фосфолипидный спектр мембран клеток имеет универсальный характер и, в данном случае предполагается нормализация исследуемыми экстрактами фосфолипидного состава мембран тромбоцитов, что существенно снижает их повышенный при инфаркте миокарда агрегационный по­тенциал.

Помимо экдистероидов в состав изучаемых экстрактов входят и такие биоло­гически активные вещества как флавоноиды [Вересковский В.В., Чекалинская И.И., 1980; Opletal L. et al., 1997; Skiba A., Weglard Z., 1999]. Как известно, флаво- ноидь1 повышают уровень цАМФ и цГМФ в тромбоцитах за счет ингибирования фосфодиэстераз, осуществляющих метаболический распад циклических нуклео- тидов [Beretz А. et al., 1982; Landolfi R. et al., 1984]. Можно предположить, что ЭЭСР за счет флавоноидной фракции могут снижать активность фосфолипазы А₂ и фосфолипазы С [Gschwendt М. et al., 1983]. Это приводит к ограничению дисба­ланса липидного спектра мембран клеток, обеспечивая тем самым естественную атромбогенность тромбоцитов и уменьшению их агрегационной активности.

Анализируя механизмы влияния ЭЭСР на коагуляционные свойства крови, следует отметить, что тромбоциты являются центральным звеном гемостаза. Для взаимодействия факторов коагуляции в циркулирующей крови необходимы фос- фолипиды поврежденных тромбоцитов, на поверхности которых создаются опти­мальные стерические отношении для факторов свертывания крови [Балуда В.П. и др., 1995; Макаров В.А., 1998]. Очевидно, что экдистероидсодержащие экстракты, снижая функциональную активность тромбоцитов, угнетают реакции активации факторов свертывания крови, что приводит к уменьшению гиперкоагуляционного синдрома в условиях модели инфаркта миокарда.

Таким образом, курсовое применение ЭЭСР у крыс с инфарктом миокарда сопровождается антиагрегантным и гипокоагуляционным эффектами, о чем сви­детельствуют снижение АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов, замедле­ние фаз свертывания крови, увеличение протромбинового времени и активиро­ванного частичного тромбопластинового времени.

Расстройства в системе гемостаза являются неотъемлемым компонентом па­тогенеза артериальной гипертензии. Активация свертывания крови и фибриноли- за при данной патологии обусловлена повышением деятельности симпатоадрена- ловой системы [Петрищев H.H., 1990]. Вместе с тем активация фибринолиза на­блюдается лишь на ранних этапах формирования артериальной гипертензии, по­скольку в дальнейшем отмечается угнетение этого ферментативного процесса. Указанный сдвиг сочетается с гиперагрегацией, что создает предпосылки для раз­вития тромбозов. Уже на первой стадии артериальной гипертензии преобладание прессорного компонента в системе гемостаза проявлялось повышенной внутрисо- судистой активацией тромбоцитов [Маклецова С.А., Галявич A.C., 2003; Шляхто Е.В. и др., 2004].

Нарушение тромбоцитарного звена гемостаза при артериальной гипертензии связано с действием ряда факторов, вызывающих изменения биохимических и биофизических свойств тромбоцитов и, как следствие, нарушающих их функцио­нальную активность [Шестакова С.А., 1990]. Высокое систолическое и диастоли- ческое давление является фактором риска возникновения артериальных тромбо­зов. Гидродинамический стресс повреждает эндотелий сосудов, при этом наруша­ется активность релаксирующего фактора [Мазур H.A., 2003; Шляхто Е.В., Кон- ради А.О., 2003; Esler М, 1997]. В интиме сосудов происходит накопление мак­рофагов, стимулируется пролиферация гладкомышечных клеток и компонентов соединительной ткани в стенке сосудов. В условиях снижения антитромбогенного потенциала стенки сосудов повышается вероятность активизации кровяных пла­стинок при контакте с эндотелиоцитами [Балуда В.П. и др., 1999; Шляхто Е.В. и др., 2004].

Достоверная взаимосвязь между системным артериальным давлением и ин­тенсивностью агрегации тромбоцитов, очевидно, объясняется тем, что с повыше­нием артериального давления в начальный период заболевания изменяются усло­вия протекания крови в сосудах: скорость сдвига увеличивается, касательное дав­ление на эндотелий сосудов становится выше критического [Ваизова O.E. и др., 2000; Дроздова Г.А., 2000]. В ответ на эти реакции возникают мембранные дефек­ты кровяных пластинок, усиливается их агрегация, идут реакции высвобождения из гранулярного аппарата физиологически активных веществ, способствующих еще более сильной агрегации тромбоцитов и регионарным спазмам сосудов [Lande К. et al., 1988].

Как известно, активация тромбоцитов в сосудистом русле сопровождается высвобождением из гранул тромбоцитарных факторов – ß-тромбоглобулина, фак­тора 4, обладающего антигепариновой активностью. Повышение содержания этих факторов в плазме крови является показателем активации тромбоцитов in vivo. Так, во многих исследованиях [Blann A.D., Weite М.А., 1996] обнаружено увели­чение уровня ß-тромбоглобулина в плазме больных артериальной гипертензией. При прогрессировании заболевания содержание ß-тромбоглобулина повышалось [Davies L.A., 1980], что сопровождалось снижением синтеза и освобождением в кровь простациклина. Свидетельством развития реакции высвобождения на высо­те гипертонического криза служит понижение содержания внутритромбоцитарно- го серотонина. Резкий выброс этого вазоконстриктора тромбоцитами может при­вести к изменениям локального сосудистого тонуса и проницаемости сосудов [Габриэлян Э.С., Акопов С.Э., 1985].

Процесс активации тромбоцитов, внешне проявляющийся изменением ихформы от дисковидной до сферической, связывают с перераспределением кальция внутри клетки, в частности мобилизацией его запасов из системы плотных ка­нальцев и увеличением содержания в цитоплазме [Иванов Е.П., 1983; Ферстрате М., Фермилен Ж., 1986; Feinstein М.В., 1980]. Повышение уровня Са²⁺ в тромбо­цитах, стимулированное различными индукторами, коррелирует с их агрегацион- ной активностью, реакцией высвобождения и дегрануляцией. При артериальной гипертензии установлено увеличение концентрации свободного Ca в тромбоци­тах [Панченко В.М. и др., 1991]. Отмечена также большая чувствительность кро­вяных пластинок к внеклеточному Са²⁺ и повышение проницаемости клеточных мембран для Са²⁺ [Кравцов Г. Н. и др., 1983]. При исследовании преформированных агрегатов in vitro установлено увели­чение их количества как у больных артериальной гипертензией, так и у крыс с ге­нетически обусловленной спонтанной артериальной гипертензией [Vlachakis N.D., Aledort L., 1980]. И в том, и в другом случае отмечено повышение агрегации тромбоцитов в ответ на действие тромбина [McGregor L. et al., 1981], коллагена и АДФ [Кравцов Г. Н. и др., 1983; Ощепкова Е.В. и др., 2000].

По мере прогрессирования артериальной гипертензии нарастает гиперкоагу­ляция крови за счет снижения ее антикоагуляционной активности и депрессии фибринолиза в результате повышения содержания в крови ингибиторов актива­ции плазминогена и антиплазминов [Орлов С.Н. и др., 1981]. При артериальной гипертензии снижен уровень антитромбина III, который отражает тяжесть тече­ния заболевания и служит прогностическим показателем, повышен синтез и кон­центрация в крови ингибитора активатора плазминогена PAI-I. Освобождение PAI-I из тромбоцитов в тромб ингибирует активацию плазминогена и тромболи- зис, что способствует росту тромба [Бабаева Д.К., 1990].

Образование тромбогенных веществ клеточными элементами сосудистой стенки в значительной мере определяется тромбогенным и гемостатическим по­тенциалом сосудов. Так, при артериальной гипертензии увеличивается образова­ние коллагена и ТхА₂, повышается биосинтез фактора Виллебранда [Кириченко JI.JI. и др., 2000].

Накопление коллагена в сосудистой стенке при артериальной гипертензии является результатом усиления его биосинтеза, главным образом, гладкомышечными клетками [Петрищев H.H., 1990]. Синтезируемый при активации тромбоциtob ТхА₂ сам вызывает агрегацию кровяных пластинок с параллельным высвобо­ждением из них АДФ, в свою очередь также индуцирующего агрегацию [Шеста- кова С.А., 1990]. В экспериментальных исследованиях установлено, что ингиби­торы тромбоксансинтетазы уменьшают образование тромбоцитарных тромбов при повреждении сосудистой стенки [Бабаева Д.К., 1990]. При исследовании ме­таболизма простаноидов обнаружено значительное образование ТхА₂ в тромбоци­тах как у спонтанно-гипертензивных крыс [Шестакова С.А., 1990], так и при пер­вичной артериальной гипертензии у подростков [Шестакова С.А., 1990; Uehara Y. et al., 1987]. В свете данных о единстве динамичной системы ТхА₂ – простациклин необходимо учитывать состояние биосинтеза последнего. При артериальной гипертензии образование простациклина сосудистой стенкой, главным образом эндотелиоцитами, также претерпевает изменения. Так, отмечалось увеличение продукции простациклина в аорте у крыс со спонтанной гипертензией [Dickens Р. et al., 1982]. Поскольку простациклин является одним из наиболее мощных при­родных ингибиторов агрегации тромбоцитов и сильным вазодилататором, рост его образования при артериальной гипертензии рассматривается как компенса­торная реакция. Как правило, в физиологических условиях, продукция проста­циклина преобладает над продукцией ТхА₂ и это является одним из факторов, обеспечивающих тромборезистентность сосудов. Изменения соотношения (уве­личение ТхА₂ и уменьшение простациклина) создает тромбогенную ситуацию. Подавление синтеза простациклина, например, при повреждении эндотелия, уси­ливает развитие артериальной гипертензии [Кириченко JI.JI. и др., 2000].

Хотя наиболее активными простаноидами являются ТхА₂ и простациклин, имеющиеся в литературе данные указывают на необходимость учитывать также соотношение между другими простагландинами с проагрегантным и антиагре- гантным действием. Так, в поздних стадиях артериальной гипертензии и, особен­но при гипертензивных кризах прослеживается нарушение соотношение уровней простагландинов с разнонаправленным действием на агрегацию, что коррелирует с гиперагрегацией кровяных пластинок [Габриэлян Э.С., Акопов С.Э., 1985; Ма- колкин В.И., Подзолков В.И., 2000]. Кроме того, при артериальной гипертензии эндотелиальные клетки в избытке вырабатывают прессорные агенты – эндотели- ны, которые совместно с ТхА₂ опосредуют вазоконстрикторные эффекты, подав­ляя в^зодилятационное влияние эндотелиального фактора релаксации и проста- циклина [Дроздова Г.А., 2000; Маколкин В.И., Подзолков В.И., 2000; Reznik L. et. al., 2003].

Повышенный тромбогенный потенциал крови является фактором риска тромбоэмболических осложнений при артериальной гипертензии [Бабаева Д.К., 1990; Ощепкова Е.В. и др., 2000; Поворинская Т.Э. и др., 2000]. Особенно часто эти осложнения возникают при гипертонических кризах, сопровождающихся рез­ким перепадом давления, вызывающим нарушения со стороны тромбоцитов и эн­дотелия сосудистой стенки, что приводит к расстройству гемостаза и создает предпосылки для развития тромбозов [Суслина З.А., Высоцкая В.Г., 1980; Forconi S., 2004; Kokoska L. et al., 2002]. При артериальной гипертензии установлена кор­реляционная связь между интенсивностью агрегации кровяных пластинок и сис­темным артериальным давлением [Маклецова С.А., Галявич A.C., 2003; Шляхто Е.В. и др., 2004]. Рост агрегации кровяных пластинок при артериальной гипертен­зии зафиксирован как у больных, так и в экспериментах на животных [Маклецова С.А., Галявич A.C., 2003; Поворинская Т.Э. и др., 2000; Суслина З.А., Высоцкая В.Г., 1980; Шляхто Е.В. и др., 2004; Blann A.D. et al., 1997].

В наших исследованиях агрегация тромбоцитов у спонтанно-гипертензивных крыс .достоверно отличалась от соответствующих показателей у крыс Вистар, представляющих нормотензивный контроль. Повышенная агрегационная актив­ность тромбоцитов гипертензивных крыс обусловлена более сильной, чем у нор- мотензивных животных способностью АДФ ингибировать аденилатциклазу и, как следствие, вызывать большее снижение уровня цАМФ в тромбоцитах. Понижение уровня цАМФ в тромбоцитах является одним из ранних критериев нарушения функционального состояния тромбоцитов [Постнов Ю.В., Орлов С.Н., 1987].

Контрактильные процессы, связанные с агрегацией и секрецией тромбоцитов стимулирует Са [Ферстрате М., Фермилен Ж., 1986], внутриклеточная концен­трация которого увеличивается при артериальной гипертензии [Ощепкова Е.В. и др., 2000]. Под действием Са повышается активность фосфолипазы А₂, высво­бождающей арахидоновую кислоту, продуктом метаболизма которой является мощный проагрегант – ТхА₂ [Бабаева Д.К., 1990; Uehara Y. et al., 1987]. Кроме то­го, снижается чувствительность тромбоцитов к простациклину, что при артери­альной гипертензии приводит к устранению ограничения агрегации тромбоцитов в сосудистом русле [Дроздова Г.А., 2000].

В регуляции функционального состояния системы гемостаза при патологии сердечно-сосудистой системы и артериальной гипертензии в частности активное участие принимает эндотелий сосудистой стенки [Дроздова Г.А., 2000; Шляхто Е.В., Конради А.О., 2003]. Гиперагрегация тромбоцитов при артериальной гипер­тензии может быть следствием непосредственного влияния повышенного артери­ального давления на кровяные пластинки, но большинство авторов связывают этот процесс со снижением простациклинобразующей функции эндотелия [Сус-

лина З.А., Высоцкая В.Г., 1980; Hrafnkelsdottir Т. et al., 1998]. Влияние простацик- *

лина на кровяные пластинки охватывает почти весь комплекс тромбоцитарных функций. Показано, что простациклин ингибирует первую стадию тромбоза – ад­гезию к компонентам субэндотелия и коллагену и, в результате этого, агрегацию тромбоцитов. Клеточные механизмы действия простациклина заключаются в его способности тормозить активность аденилатциклазы, уменьшать образование цАМФ в тромбоцитах, что приводит к снижению их агрегационной способности [Дроздова Г.А., 2000; Smith W.L., 1992]. Важным механизмом, модифицирующим функциональную активность тромбоцитов при артериальной гипертензии, являет­ся гемодинамический фактор, снижающий атромбогенный потенциал эндотелия *

сосудов, в результате чего повышается вероятность активизации кровяных пла­стинок при контакте с эндотелиоцитами [Балуда В.П. и др, 1999; Затейшиков Д.А. и др, 2000].

По мере прогрессирования артериальной гипертензии гиперкоагуляция крови нарастает не только в результате расстройства тромбоцитарно-сосудистого звена гемостаза, но и за счет снижения антикоагулянтной активности и депрессии фиб- ринолиза в результате повышения содержания в крови ингибиторов активации плазминогена и антиплазминов [Орлов С.Н. и др, 1981].

У спонтанно-гипертензивных крыс нами также установлено повышение ак­тивности плазменного звена гемокоагуляции, характеризующееся уменьшением времени начала, продолжительности и конца свертывания в сравнении со значе­ниями у крыс Вистар. Однако, протромбиновое время и АЧТВ у крыс линии SHR достоверно не отличались от показателей крыс Вистар.

Таким образом, изменения всего исследованного комплекса показателей системы гемостаза свидетельствует о наличии гиперкоагуляционного синдрома у спонтанно-гипертензивных крыс, проявляющегося достоверным снижением анти- агрегантной активности сосудистой стенки, повышением агрегации тромбоцитов и некоторых параметров плазменной коагуляции. Отмеченные изменения анало­гичны имеющимся расстройствам гемостаза у больных артериальной гипертензи- ей, что позволяет использовать крыс линии SUR в качестве модели этого заболе­вания при доклиническом исследовании новых лекарственных средств, влияющих на свертывающую активность крови.

Поскольку эндотелий сосудов вносит значительный вклад в антитромбогенный потенциал крови в целом и агрегацию тромбоцитов в частности [Forconi S, 2004], нами изучено влияние ЭЭСР на антиагрегантную активность сосудистой стенки у крыс линии SHR. Преинкубация сосудистого сегмента брюшной аорты гипертензивных крыс опытных групп, получавших исследуемые экстракты в те­чение 14 дней, приводила к выраженному ослаблению АДФ-индуцированной аг­регации тромбоцитов.

Способность ЭЭСР повышать антиагрегантную активность сосудистой стен­ки, уменьшать АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов у спонтанно- гипертензивных крыс, вероятно, связаны с проявлением антиокислительной ак­тивности исследуемыми экстрактами [Плотников М.Б. и др., 1998]. ПОЛ приво­дит к изменению содержания мембранных фосфолипидов в тромбоцитах [Раль- ченко И.В., 1998], а также активирует окислительную модификацию липопротеи- нов плазмы крови, которые приобретают при этом проагрегантные свойства [Бе­лова Л.А. и др., 2000; Бышевский Л.Ш. и др., 2000; Климов А.Н., Никульчева Н.Г., >1999], оказывают цитотоксическое и деструктивное влияние на клетки эндо­телия кровеносных сосудов [Зенков Н.К. и др., 2001], синтезирующих простацик- лин. Снижение синтеза простациклина при повреждении эндотелия, усиливает развитие артериальной гипертензии [Климов А.Н., Никульчева Н.Г., 1999]. Мож­но предположить, что исследуемые экстракты, снижая образование свободных радикалов, предотвращая окислительное повреждение липопротеинов низкой плотности у спонтанно-гипертензивных крыс, нормализуют состояние тромбоци- тарного звена гемостаза, повышают антиагрегантную активность сосудистой стенки.

Помимо влияния на тромбоцитарно-сосудистое звено гемостаза, ЭЭСР ока­зывали воздействие и на коагуляционную активность крови у спонтанно- гипертензивных крыс, что выражалось в увеличении времени начала, продолжи­тельности и конца свертывания в сравнении с контрольными показателями. По­мимо этого, наблюдалось повышение протромбинового времени у крыс БНЯ под влиянием исследуемых экстрактов.

При артериальной гипертензии весьма важным фактором тромбообразования является состояние эндотелия сосудов [Шляхто Е.В. и др., 2004; Ез1ег М., 1997]. В этих условиях снижается способность эндотелия синтезировать противосверты- ваюпСие и фибринолитические вещества (активатор плазминогена, простацик- лин) и инактивировать прокоагулянтные агенты [Шилкина Н.П., 2001; МепаБЫ Б. е1 а1., 1991]. Повышение антиагрегантной активности сосудистой стенки под дей­ствием экдистероидсодержащих экстрактов свидетельствует об их благоприятном действии на эндотелиальные клетки, восстанавливающем не только антитромбо- цитарный, но и антикоагуляционный эффект эндотелия. Следствием такого действия исследуемых экстрактов явилось повышение времени свертывания крови у спонтанно-гипертензивных крыс. Кроме влияния, опосредованного через тромбо- цитарно-сосудистые эффекты, на наш взгляд, нельзя исключить и возможного прямого воздействия ЭЭСР на плазменный гемостаз. Этот эффект может быть обусловлен флавоноидной фракцией, поскольку известно, что многие флавонои- ды обладают способностью ингибировать НАД-Н-эпоксидредуктазу [М1с1с11е1:оп Е. е1 а1., 2000], уменьшая, тем самым, активацию факторов свертывания крови в пе­чени.

Таким образом, ЭЭСР при их курсовом введении способствуют снижению гиперкоагуляционной активности крови у спонтанно-гипертензивных крыс за счет уменьшения активности сосудисто-тромбоцитарного и плазменного звеньев гемостаза.

Важным моментом повышения тромбогенного потенциала крови при ин­фаркте миокарда, ишемии мозга и артериальной гипертензии является активация тромбоцитов, возникающая как спонтанно, так и под действием различных ин­дукторов агрегации [Габриэлян Э.С., Акопов С.Э., 1985; Соколов Е.И., 2000; Со- пина Н.В., 1990]. Оценка влияния ЭЭСР на процессы активации тромбоцитов на фоне действия различных активаторов позволяет определить предположительный механизм их действия. Поскольку активация и агрегация тромбоцитов происхо­дит под действием большого числа физиологических агонистов, отличающихся друг от друга химической структурой и «точкой приложения» на кровяных пла­стинках, при изучении новых антиагрегантных средств и для контроля над эффек­тивностью проводимой антиагрегантной терапии необходимо проводить исследо­вание активности тромбоцитов в ответ на различные индукторы [Баркаган З.С., Момот А.П., 2001]. В настоящее время для диагностики большинства тромбоци- топатий, а также для анализа действия антитромбоцитарных средств чаще всего используют такие индукторы как АДФ, коллаген, ристомицин, тромбин [Баркаган «

З.С., Момот А.П., 2001; Белоусов Ю.Б., 2003]. Основой взаимодействия тромбо­цитов с практически любыми индукторами агрегации считается их связывание со специализированными рецепторами, локализованными на внешней поверхности мембраны. Не исключено, что проагреганты влияют на тромбоциты посредством сразу нескольких мембранных механизмов [Алмазов В.А. и др., 1990].

В наших исследованиях при изучении спектра антиагрегантной активности исследуемых экстрактов в опытах in vitro в качестве индукторов агрегации при­менялись тромбин, коллаген и арахидоновая кислота.

Тромбин и коллаген являются сильными физиологическими агонистами, ко­торые при взаимодействии со специфическими рецепторами вызывают все фи­зиологические ответы тромбоцитов: изменение формы клеток, их агрегацию и секрецию [Зубаиров Д.М., 2000]. Под действием тромбина и коллагена происхо­дит весьма значительное увеличение выработки ТхА₂, фактора активации тром­боцитов, мобилизация внутриклеточного кальция [Алмазов В.А. и др., 1990; Габ- риэлян Э.С., Акопов С.Э., 1985].

В нашем исследовании при использовании тромбина в качестве агрегирую­щего агента преинкубация богатой тромбоцитами плазмы с ЭЭСР достоверно уменьшала степень агрегации тромбоцитов по сравнению с контролем. Способ­ность ЭЭСР снижать тромбин-индуцированную агрегацию кровяных пластинок является важным звеном в суммарном механизме антикоагуляционного действия экдистероидсодержащих экстрактов, поскольку тромбин является не только фак­тором агрегации тромбоцитов, но и продуктом плазменного коагуляционного каскада свертывания крови [Берковский A.JI. и др., 2001].

Преинкубация богатой тромбоцитами плазмы с ЭЭСР снижала коллаген- индуцированную агрегацию тромбоцитов. Однако достоверно на этот показатель воздействовал только ЭЛС, при использовании ЭЛХ в этих же условиях выявило тенденцию к снижению агрегационной активности кровяных пластинок. Подав­ление коллаген-индуцированной агрегации тромбоцитов исследуемыми экстрак­тами свидетельствует об их способности ослаблять ключевой момент в активации гемостаза – взаимодействие с коллагеном эндотелия [Зубаиров Д.М., 2000; Соко­лов Е.И., 2000].

Инкубация богатой тромбоцитами плазмы с ЭЭСР при использовании в ка­честве индуктора агрегации арахидоновой кислоты оказывала выраженное влия­ние на функциональную активность тромбоцитов, значительно уменьшая агрега­цию кровяных пластинок по сравнению с контрольными значениями.

Кроме того, в опытах ex vivo на различных моделях сердечно-сосудистых расстройств (ишемия мозга, инфаркт миокарда и артериальная гипертензия) от­мечено ослабление ЭЭСР агрегации тромбоцитов в ответ на важнейший физиоло­гический индуктор – АДФ. АДФ в зависимости от концентрации способен вызы­вать обратимую, реализуемую через специфические рецепторы, и необратимую, связанную с мобилизацией внутриклеточного кальция, агрегацию тромбоцитов [Алмазов В.А. и др., 1990; Daniel J.L. et al., 1998].

Анализируя полученные результаты, следует отметить, что ЭЭСР способны ослаблять агрегацию тромбоцитов в ответ на различные физиологические агони- сты: АДФ, тромбин, коллаген, арахидоновую кислоту, оказывающие свое дейст­вие через различные сигнальные системы в клетке. Это свидетельствует о неспе­цифическом характере антиагрегантной активности исследуемых экстрактов, ко­торая; вероятно, реализуется не через рецепторные механизмы, а воздействием на структуру мембран тромбоцитов, эндотелия. Результатом такого влияния является изменение чувствительности рецепторов тромбоцитов к индукторам различной природы и повышение антиагрегантной активности сосудистой стенки.

Нарушения в системе гемостаза обнаруживаются не только при сердечно­сосудистых заболеваниях, но и при многих экстремальных воздействиях на орга­низм, наиболее распространенным из которых является физическая нагрузка. Фи­зическая нагрузка достаточной мощности и длительности приводит к нарушению не только реологических свойств крови, но и вызывает выраженные сдвиги раз­личных параметров гемостаза [Голышенков С.П., Тайрова М.Р., 2002; Рехвиа- швили М.В. и др., 2001; Marsh N.A., Gaffney P.J., 1982], что подтверждает ко- функционирование систем реологии крови и гемостаза в норме и при патологиче­ских состояниях [Муравьев A.B. и др., 2001; Багракова C.B. и др., 2002; Vasquetz- Vivar J. et al., 1998]. Развитие утомления при дозированной физической нагрузке коррелирует с изменениями гемореологии, коагуляционной и фибринолитической активности [Голышенков С.П., Тайрова М.Р., 2002; Мельников A.A. и др., 2002;

Мельников A.A. и др., 2002а; El-Sayed M.S. et al., 2000]. Возможным механизмом зависимости физической работоспособности от степени нарушения указанных параметров является ухудшение кислородтранспортных возможностей организма [Дембо А.Г., 1984], а также возможность микротромбообразования, что может привести к непредвидимым тромботическим осложнениям [Муханов O.A. и др., 2002].

Повышение агрегационной активности тромбоцитов отмечено в эксперимен­тах при однократной велоэргометрической нагрузке большой интенсивности у мужчин [Голышенков С.П. и др., 2004]. Физическая нагрузка у спортсменов на тредбане до отказа от выполнения работы вызывала резкое повышение коагуля- ционного потенциала по данным тромбоэластографии, увеличение концентрация фибриногена и фактора XIII, снижение фибринолиза [Муханов O.A. и др., 2002]. Полагают, что в этот период повышение свертываемости крови и снижение фиб­ринолиза расценивается как защитная реакция организма на стрессорные воздей­ствия [Муханов O.A. и др., 2002]. Важным звеном в формировании ответной ре­акции системы гемостаза на мышечную деятельность являются клетки крови – преимущественно тромбоциты [Doni M.J. et al., 1994; Wang J.S. et al., 1994] и эритроциты [Мельников A.A. и др., 2002; Мельников A.A. и др., 2002а].

В наших исследованиях нагрузка при беге на тредбане до полного физиче­ского утомления крыс вызывала изменение ряда тромбоцитарных и коагуляцион- ных параметров крови, по сравнению с показателями интактных животных: отме­чен рост агрегации тромбоцитов, уменьшение времени начала, продолжительно­сти и конца свертывания. Следовательно, истощающая физическая нагрузка при беге на тредбане вызывала изменение функциональной активности тромбоцитов и коагуляционных свойств крови у крыс, что выражалось в увеличении агрегации тромбоцитов и гиперкоагуляции крови.

Интенсивная физическая нагрузка по-разному влияет на тромбоцитарно- коагуляционный потенциал крови у людей – нетренированных и при постоянной физической нагрузке [Багракова C.B. и др., 2002; Голышенков С.П., Садовничий А.Б., 1998]. Такая же закономерность отмечена и в экспериментах на животных [Senturk U.K. et al, 2001]. Так, в опытах на крысах, которые подвергались острой истощающей нагрузке – бег на тредбане, структурные и функциональные (нару­шение деформируемости) изменения в эритроцитах и повышение уровня ТБК- активных продуктов в крови наблюдалось только у нетренированных, так назы­ваемых “сидячих крыс”, и не отмечены у животных, которые подвергались регу­лярной тренировке в течение месяца. Отмеченные различия связаны с тем, что интенсивная физическая нагрузка резко увеличивает сдвиговое напряжение, что приводит к временному повышению вязкости крови, но одновременно стимули­рует продукцию NO, простациклина эндотелием сосудистой стенки, которые вы­зывают вазодилятацию и способствуют приведению коагуляционных и геморео­логических параметров к исходным значениям [Turchetti V. et al, 2004], т.е. эндо­телий выполняет регулирующую функцию. Интенсивная физическая нагрузка у нетренированных людей вызывает окислительный стресс, в условиях которого эндотелий утрачивают свою регулирующую роль за счет того, что супероксидный радикал инактивирует N0, продуцируемый эндотелием в ответ на сдвиговое на­пряжение, возникающее при физической нагрузке с образованием пероксинитри- тов, которые в свою очередь разлагаются на такие свободные радикалы как ОН и N0₂ [Шастун С.А. и др, 2002; Massimo C.D. et al, 2004; Sen C.K., 1995]. Цепные свободнорадикальные реакции оказывают цитотоксическое действие на эндоте­лий, Клетки крови и сдвигают баланс в сторону вазоконстрикции, агрегации тром­боцитов и гемокоагуляции [Varlet-Marie Е, Brun J, 2004]. Кроме того, усиленное образование липидных перекисей в тромбоцитах способствует аккумуляции внутриклеточного Са²⁺, подавлению активности аденилатциклазы с уменьшением концентрации цАМФ, модуляции активности рецепторных белков и функции со­кратительного аппарата кровяных клеток [Alexandre A. et al, 1986].

В связи с этим, важным направлением повышения толерантности к физиче­ской нагрузке у людей с различными сердечно-сосудистыми заболеваниями, а также увеличения работоспособности при истощающей физической нагрузке, в частн’ости в спортивной медицине, может быть применение препаратов расти­тельного происхождения, не относящихся к допинговым средствам, способных оказывать нормализующее действие на тромбоцитарно-коагуляционный потенци­ал крови.

Применение ЭЭСР в течение 14 дней до интенсивной физической нагрузки, вызывало у крыс снижение агрегации тромбоцитов без существенных изменений других показателей свертывающей системы крови.

Антиагрегантное действие ЭЭСР в условиях истощающей физической на­грузки, вероятно обусловлено их антиоксидантными и мембраностабилизирую- щими свойствами [Miliauskas G. et al., 2005; Koleckar V. et al., 2008; Kokoska L., Janovska D., 2009]. Ингибирование процессов перекисного окисления липидов под действием ЭЭСР может приводить к нормализации реологических свойств крови, способствуя улучшению микроциркуляции и повышению работоспособности. Предварительное назначение витаминов-антиоксидантов (витамины С и Е) кры­сам в течении месяца препятствует накоплению ТБК-активных продуктов и на­рушению деформируемости эритроцитов, вызванных однократной физической нагрузкой [Азизов А.П. и др., 1998; Сейфулла Р.Д., 1999; Senturk U.K. et al., 2001]. При применении ЭЭСР эндотелий сосудов испытывает меньшие механические воздействия со стороны эритроцитов, степень “ригидности” которых под воздей­ствием антиоксидантной защиты снижается, что уменьшает вероятность повреж­дения эндотелия сосудистой стенки и активации тромбоцитов. Однако следует отметить слабое защитное действие исследуемых экстрактов на свертывающую систему крови при экстремальной физической нагрузке по сравнению с их эффек­тами в условиях моделей сердечно-сосудистых заболеваний. Возможно, это свя­зано с тем, что при моделировании сердечно-сосудистых заболеваний ЭЭСР вво­дили уже на фоне воспроизведенных патологических состояний и препараты пре­пятствовали развитию механизмов, участвующих в активации свертывающей сис­темы крови. В случае же применения экстрактов при физической нагрузке, их курсовое введение осуществлялось интактным животным, которые затем подвер­гались однократной истощающей нагрузке на тредбане. Вероятно, назначение ЭЭСР здоровым животным не оказывает влияния на тромбоцитарный и коагуляционный потенциал крови и, в связи с этим, не препятствует формированию гиперкоагуляционного синдрома при предъявлении однократной экстремальной фи­зической нагрузки крысам.

Экстракты экдистероидсодержащих растений в условиях моделей СГТВК у крыс оказывали в разной степени выраженное, но однонаправленное действие как на тромбоцитарно-сосудистое, так и плазменное звенья гемокоагуляции. Так, вве­дение исследуемых экстрактов вызывало уменьшение агрегации тромбоцитов, ак­тивированных универсальным индуктором – АДФ у крыс с ишемией головного мозга, инфарктом миокарда, артериальной гипертензией и у животных при беге на тредбане до полного физического утомления. Специально выполненная серия опытов in vitro позволила установить, что ЭЭСР ослабляли агрегацию тромбоци­тов, вызванную тромбином, коллагеном и арахидоновой кислотой – индукторами, реализующими свой эффект через различные рецепторные механизмы. Получен­ные результаты позволяют сделать вывод о том, что антиагрегантное действие ис­следуемых экстрактов является результатом их неспецифического влияния на мембраны тромбоцитов.

К настоящему времени получила развитие концепция о параллелизме про­цессов, происходящих в эритроцитарной мембране и в мембранах клеток других органов и тканей. Исследование структурно-функционального состояния эритро­цитов с успехом было использовано при изучении целого ряда патологических состояний (ишемическая болезнь сердца, артериальная гипертензия, опухолевый рост, шизофрения). При этих заболеваниях нарушения метаболизма в эритроци­тах определенным образом отражаются, в силу системности патологического процесса, на течении пластических реакций в других органах и тканях [Новицкий В.В. и др., 2004].

В связи с этим, исследование фосфолипидного спектра мембран эритроцитов приобретает еще большую актуальность при изучении патофизиологических ме­ханизмов развития различных заболеваний в аспекте их взаимосвязи с функцио­нальной системой реологии крови. Поскольку, структурно-функциональные свой­ства эритроцитов являются главной детерминантой гемореологического статуса в норме и при патологии, вскрытие молекулярных механизмов формирования мем­бранных нарушений позволит разработать методические подходы к фармакологи­ческой коррекции многих заболеваний.

Нарушения морфо-функциональных и структурно-метаболических свойств эритроцитов исследованы нами на моделях ишемии головного мозга, инфаркта миокарда, артериальной гипертензии и сахарного диабета.

Модель ишемии головного мозга характеризовалась снижением содержания общего количества липидов и фосфолипидов, в том числе холестерина. Среди фосфолипидов максимальным было уменьшение содержания ФХ и СМ. В мень­шей степени снижалось количество ФС. Содержание ФЭА достоверно не отлича­лось у интактных и контрольных крыс. На фоне снижения общего количества фосфолипидов в эритроцитарных мембранах при ишемии головного мозга досто­верно возросло содержание фракции лизофосфолипидов по сравнению с интакт- ными животными. В разной степени выраженное изменение содержания отдель­ных фосфолипидов привело к значимому сдвигу их соотношения. Так, макси­мальной стала доля ФЭА (у интактных животных максимальной являлась доля ФХ) и значительно увеличилось относительное содержание ЛФЛ. При ишемии головного мозга у крыс наблюдалось изменение соотношения компонентов фос­фолипидов наружного и внутреннего слоев эритроцитарной мембраны, что выра­жалось в уменьшении содержания ФХ и СМ (наружный слой) и возрастании от­носительной доли ФЭА и ФС (внутренний слой). Стабильность липидного бислоя во многом обусловлена определенным балансом (соотношением) составляющих его фосфолипидов, при этом распределение фосфолипидов в мембране эритроци­та носит асимметричный характер [Kumar V.V., 1993]. Значительное снижение в мембранах количества ФХ и СМ и небольшое уменьшение ФС приводило к уменьшению площади внешнего монослоя липидов относительно внутреннего, что может являться одной из причин нарушения стабильности бислоя и деятель­ности ряда мембраносвязанных ферментов, активность которых зависит от фос- фолипидного окружения [Черницкий Е.А., Воробей A.B., 1981; Новицкий В.В., Рязанцева Н.В., 2002]. Кроме этого, в условиях ишемии головного мозга опреде­ленный вклад в дестабилизацию эритроцитарных мембран может вносить и зна­чительный рост содержания в мембранах эритроцитов фракции ЛФЛ. ЛФЛ явля­ются обязательным компонентом мембран, однако избыточное их накопление ве­дет к снижению температуры фазового перехода, что повышает внутреннюю под­вижность мембран и меняет упаковку в ней липидов [Грибанов Г.А., 1991]. Кроме того, повышение в мембране ЛФЛ способствует переходу липидного бислоя в монослой, возрастанием проницаемости мембран для ионов Na⁺ и К⁺, образова­нию гидрофильных каналов с последующей везикуляцией мембраны эритроцита и диск-эхиноцитарной трансформацией [Грибанов Г.А., 1991].

Обнаруженные дистрофически-дегенеративные изменения липидного соста­ва мембран эритроцитов крыс с ишемией головного мозга существенным образом отражается на их морфологических характеристиках. У крыс с ишемией головно­го мозга снижалось содержание дискоцитов, повышалась доля переходных и  предгемолитических форм эритроцитов.

ЭЛС при курсовом применении способствовал повышению количества об­щих липидов и общих фосфолипидов в сравнении с контрольными значениями. Повышение содержания фракции фосфолипидов происходило, в основном за счет увеличения концентрации СМ и ФС. Содержание ФХ у крыс, получавших экс­тракт, было незначительно выше уровня у контрольных животных. В опытной группе происходило существенное снижение содержания ЛФЛ до уровня интакт­ных крыс. Снижение под действием ЭЛС содержания ЛФЛ рассматривается как весьма положительный эффект, т.к. избыточное накопление ЛФЛ сопровождается неблагоприятными критическими перестройками, приводящими к дестабилиза­ции мембраны [Черницкий Е.А., Воробей A.B., 1981; Грибанов Г.А., 1991; Геннис Р., 1997]. Вероятно, снижение концентрации ЛФЛ, нормализация содержания СМ (компонент наружного слоя) и ФС (внутренний слой) в мембранах эритроцитов крыс с ишемией головного мозга под влиянием курсового введения ЭЛС, в итоге, могло способствовать восстановлению морфологических характеристик красных клеток крови. Так, содержание дискоцитов в периферической крови было досто­верно выше, в опытной группе в сравнении с контрольными значениями и не от­личалось от показателей интактной группы. Количество эритроцитов переходной формы в опытной группе было достоверно ниже по сравнению со значениями как в контрольной, так и в интактной группах. Значительным было влияние ЭЛС на содержание дегенеративных форм эритроцитов: их доля в опытной группе была существенно ниже, чем в контроле и достоверно не отличалась от значений у ин- тактных животных. Полученные результаты позволяют предполагать, что эритро- проте’кторный эффект ЭЛС направлен на переходные формы эритроцитов, кото­рые являются своеобразным резервом, воздействуя на который можно увеличить количество дискоцитов. С одной стороны, исследуемый экстракт препятствует дальнейшей деградации клеток, уменьшая транформацию переходных форм эрит­роцитов в необратимо измененные дегенеративные формы, останавливая этот процесс на стадии предгемолитических форм; с другой – способствует восстанов­лению полноценной дискоидной формы в популяции эритроцитов с обратимыми переходными изменениями. Повышение количества дискоидных элементов в пе­риферической крови под влиянием ЭЛС может приводить к улучшению такого ключёвого показателя реологии крови, как деформируемость эритроцитов, по­скольку этим свойством, в полной м.ере обладают лишь дискоциты.

Таким образом, курсовое применение ЭЛС в условиях ишемии головного мозга у крыс препятствует процессам деградации эритроцитов за счет положи­тельного влияния на липидный спектр мембран красных клеток крови.

У крыс с ишемией головного мозга, получавших ежедневно в течение 5 суток ЭЛХ, количество общих липидов достоверно превышало значения у контрольных животных, но не достигало уровня показателя в интактной группе. Повышение содержания фосфолипидной фракции происходило в основном, за счет ФХ и СМ. ЭЛХ,”в отличие от ЭЛС не оказывал достоверного влияния на содержание ЛФЛ в условиях модели ишемии головного мозга. У крыс с ишемией головного мозга, получавших в течение 5 дней ЭЛХ, количество дискоцитов не отличалось от зна­чений в контрольной группе и было достоверно снижено по сравнению с показа­телем у интактных животных. Число переходных форм значимо не отличалось от контроля и было выше, чем в интактной группе. Вместе с тем, следует отметить, что соотношение различных типов клеток принадлежащих к данной группе было отличным как от контроля, так и от интактных значений. Так, в группе животных, получавших ЭЛХ количество дискоцитов с гребнем и с множественными вырос­тами было достоверно более низким, чем у контрольных и у интактных живот­ных. С другой стороны, число клеток в виде эллипса и дискоцитов с одиночным выростом превосходило контрольные значения. Среди эритроцитов с предгемо- литической формой, по сравнению с контролем, возрастала доля куполообразных и сферических клеток; снижалась доля клеток в виде спущенного мяча. Однако,общее количество эритроцитов предгемолитической формы в опытной группе превосходило контрольные значения. У леченных животных количество дегене­ративно измененных эритроцитов было достоверно меньшим, чем в контроле и не различалось со значениями в интактной группе. Неоднозначность влияния ЭЛХ на поверхностную архитектонику эритроцитов крыс с ишемией головного мозга, возможно обусловлено преимущественным восстановлением фосфолипидов на­ружного слоя мембраны (СМ и ФХ), что и явилось причиной увеличения числа предгемолитических форм даже в сравнении с контролем. Тем не менее, сумма положительных эффектов ЭЛХ в отношении морфологии эритроцитов превышает наличие нежелательных изменений клеток красной крови крыс с ишемией голов­ного мозга.

Таким образом, курсовое введение ЭЛХ крысам с ишемией головного мозга повышает содержание липидов в эритроцитарных мембранах, частично нормали­зует фосфолипидный спектр, что очевидно приводит к снижению доли дененера- тивно измененных эритроцитов.

При сопоставлении активности ЭССР в отношении их влияния на липидный состав мембран и поверхностную архитектонику эритроцитов в условиях модели ишемии головного мозга предпочтение отдается ЭЛС. ЭЛС более выраженно препятствует процессам деградации эритроцитов, за счет положительного влия­ния на соотношение фосфолипидов наружного и врутреннего монослоев и сниже­ния количества лизофосфолипидов в мембранах эритроцитов крыс с ишемией. При инфаркте миокарда у крыс наблюдается снижение обшего количества липидов и общих фосфолипидов в сравнении с интактными значениями. У животных с инфарктом миокарда происходило снижение содержания холестерина, однако соотношение холестерин/фосфолипиды не отличалось от значений в ин- тактной группе, что свидетельствует об уменьшении количества холестерина в той же степени, что и фосфолипидной фракции. Среди фосфолипидов максималь­ным было снижение содержания ФХ и СМ. Количество ФЭА и ФС достоверно не отличалось от аналогичных показателей у интактных животных. Несмотря на снижение при инфаркте миокарда в эритроцитарных мембранах содержания фос­фолипидов, достоверно возросло по сравнению с интактными крысами количест­во лизофосфолипидов. Следствием изменения количества отдельных фосфолипи­дов явился сдвиг их процентного соотношения. Так, доли ФЭА, ФС и ФХ стали равными, а процентное содержание СМ по сравнению с интактными животными не изменилось. Наблюдалось увеличение относительного содержания лизофосфо­липидов при инфаркте миокарда в сравнении с интакными значениями. У крыс с инфарктом миокарда наблюдается уменьшение процентного содержания фосфо­липидов (СМ и ФХ), формирующих наружный слой мембраны эритроцита и от­носительное увеличение компонентов внутреннего слоя – ФЭА и ФС. Интересно отметить, что аналогичные изменения соотношения фосфолипидов наружного и внутреннего слоя мембраны эритроцитов отмечены и у крыс с ишемией головно­го мозга. Помимо этого, в мембранах эритроцитов крыс с инфарктом миокарда происходило накопление повышенного количества ЛФЛ, что может способство­вать гемолизу красных клеток крови [Грибанов Г.А., 1991]. Одновременно на­блюдалось снижение содержания ФХ, что косвенно свидетельствует об активации фосфолипазы А₂, катализирующей переход ФХ в ЛФЛ [Марри Р. и др., 1993; Эл­лиот В., Эллиот Д., 1999]. Обнаруженные изменения липидного состава мембран эритроцитов крыс с инфарктом миокарда закономерно отразились на состоянии поверхностной архитектоники красных клеток крови.

На 5-е сутки после инфаркта миокарда в периферической крови крыс досто­верно снизилось содержание дискоцитов. Статистически значимо, по сравнению с интактной группой, повышалась доля переходных форм, в основном за счет воз­растания количества дискоцитов с выростом, эллипсов и эритроцитов в виде ту­товой ягоды. Увеличивалось количество предгемолитических форм по сравнению с интактной группой. Достоверно возросла доля всех форм эритроцитов, относя­щихся к данной группе, однако соотношение их (преобладание клеток куполооб­разной и сферической формы) было подобно интактным животным. Число деге­неративных форм эритроцитов у крыс с инфарктом миокарда было повышено в сравнении со значениями здоровых крыс.

Курсовое введение ЭЛС крысам с инфарктом миокарда приводило к увели­чению содержания общих липидов, однако эти изменения носили характер тен­денции. Содержание фосфолипидной фракции достоверно не отличалось от уров­ня в контроле, вместе с тем не было достоверных различий и с группой интактных животных. Под влиянием курсового введения ЭЛС содержание холестерина и от­ношение холестерин/фосфолипиды достоверно не отличались ни от интактных значений, ни от контроля. Количество ФС и СМ у крыс, получавших ЭЛС было достоверно выше, чем в контроле и не отличалось от значений в интактной груп­пе. Процентное соотношение массовых долей ФЭА и ФС у животных, получав­ших экстракт, соответствовало аналогичным показателям в контрольной группе, содержание ФХ снижалось, а доля СМ была достоверно выше. При использова­нии ЭЛС у крыс с инфарктом миокарда наблюдалось восстановление процентного содержания фосфолипидов наружного (СМ) и внутреннего (ФС) слоя мембраны. У крыс с инфарктом миокарда, получавших ЭЛС, происходило значительное снижение содержания ЛФЛ. Данные изменения липидного состава мембран эрит­роцитов под действием ЭЛС привели к улучшению показателей морфологии эритроцитов крыс с инфарктом миокарда.

Курсовое применени ЭЛС приводило к увеличению содержания дискоцитов у крыс с инфарктом миокарда в сравнении со значениями в контрольной группе. Количество переходных форм в опытной группе достоверно снижалось. Сниже­ние происходило за счет достоверного уменьшения количества клеток в форме эллипса, дискоцитов с выростом и дискоцитов с множественными выростами. У крыс, получавших ЭЛС доля предгемолитических форм была достоверно мень­шей, по сравнению с контрольной группой, за счет снижения количества куполо­образных и сферических эритроцитов. Использование ЭЛС препятствовало воз­растанию доли дегенеративно измененных эритроцитов.

Таким образом, курсовое применение ЭЛС у крыс с инфарктом миокарда способствовало снижению дегенеративных изменений эритроцитов перифериче­ской крови за счет нормализации липидного состава мембран красных клеток.

У крыс с инфарктом миокарда, получавших ЭЛХ, содержание общего коли­чества липидов не отличалось от величин в контрольной группе. Под действием ЭЛХ содержание фосфолипидной фракции возрастало, однако изменение данного показателя не достигало необходимого уровня статистической значимости, вместе с тем не было достоверных различий и от соответствующих значений в группе интактных животных. Соотношение холестерин/фосфолипиды не отличалось от значений контрольной и интактной групп. Восстановление фосфолипидного спек­тра под влиянием ЭЛХ происходило в основном за счет СМ, представляющего наружный слой мембраны эритроцита и ФС (компонента внутреннего слоя мем­браны). Количество ФЭА и ФХ у крыс, получавших ЭЛХ достоверно не отлича­лось от значений в контрольной группе. Курсовое введение ЭЛХ достоверно сни­зило содержание ЛФЛ в мембранах эритроцитов крыс с инфарктом миокарда. У крыс, получавших ЭЛХ, достоверно снизилось, процентное содержание ФХ и ЛФЛ и возросла относительная доля СМ в сравнении с контрольными значения­ми. Обнаруженные изменения липидного состава мембран эритроцитов под дей­ствием курсового применения ЭЛХ проявились в улучшении поверхностной ар­хитектоники красных клеток крови.

При курсовом введении ЭЛХ крысам с инфарктом миокарда количество дискоцитов было достоверно выше по сравнению с аналогичным показателем кон­трольной группы животных. Число переходных форм у крыс, получавших ЭЛХ, было достоверно ниже, чем в контроле. Снижение количества эритроцитов с пе­реходной формой происходило за счет достоверного уменьшения доли клеток в виде эллипса, дискоцитов с выростом и с множественными выростами. Под дей­ствием препарата достоверно снижалось количество предгемолитических форм эритроцитов. Среди них уменьшилась доля куполообразных и сферических эрит­роцитов. Количество эритроцитов в виде спущенного мяча достоверно не отлича­лось от контрольных значений, однако также не было различий и с интактной группой. Количество дегенеративно измененных эритроцитов у крыс, получав­ших ЭЛХ, было достоверно ниже, чем в контроле и не отличалось от значений у интактных животных.

Таким образом, курсовое применение ЭЛХ у крыс с инфарктом миокарда способствовало снижению дегенеративных изменений эритроцитов перифериче­ской крови за счет нормализации липидного состава мембран красных клеток.

В условиях модели инфаркта миокарда ЭЛС и ЭЛХ обладали схожей актив­ностью, в равной степени воздействуя на содержание общих липидов и фосфоли­пидов, восстанавливали соотношение фосфолипидов наружного и внутреннего монослоев и существенно снижали концентрацию лизофосфолипидов.

У крыс линии БРЖ наблюдалось достоверное снижение содержания общих липидов и общих фосфолипидов в тенях эритроцитарных мембран в сравнении с показателями нормотензивных крыс. У крыс с артериальной гипертензией нами отмечено повышение относительной доли холестерина. Так, соотношение холе- стерин/фосфолипиды было достоверно выше по сравнению с крысами линии Вис- тар. Среди фосфолипидов максимальным было снижение, по сравнению с нормо- тензивными крысами, содержание ФХ. Наблюдаемое уменьшение количества ФЭА и ФС не достигало уровня статистической значимости. В эритроцитарных мембранах крыс с артериальной гипертензией наблюдалась тенденция к увеличе­нию содержания фракции лизофосфолипидов. В разной степени выраженное из­менение содержания отдельных фосфолипидов привело к значимому сдвигу их соотношения. Так, максимальными стали доли ФЭА и ФС соответственно. Про­центное содержание ФХ значительно снизилось, а процентная доля СМ, несмотря на снижение его содержания, осталась неизменной. Увеличилось, по сравнению с крысами Вистар, относительное содержание ЛФЛ. У крыс линии БНЯ наблюдает­ся процентное уменьшение фосфолипидов наружного слоя мембраны – СМ и ФХ и относительное возрастание содержания компонентов внутреннего слоя мембра­ны – ФЭА и ФС. Обнаруженные изменения липидного состава мембран эритро­цитов крыс линии SHR закономерно отразились на состоянии поверхностной ар­хитектоники красных клеток крови.

Исследование поверхностной архитектоники методом сканирующей элек­тронной микроскопии показало, что в периферической крови крыс линии SHR до­стоверно снижено, по сравнению с крысами Вистар, содержание дискоцитов. Ста­тистически значимо была повышена доля переходных форм за счет возрастания количества эритроцитов в форме эллипса, плоского диска, дискоцитов с выростом и с гребнем. Содержание эритроцитов переходных форм достоверно не измени­лось. Увеличивалось количество предгемолитических форм по сравнению с ин- тактной группой. У крыс с артериальной гипертензией среди клеток с предгемо- литической формой преобладали куполообразные эритроциты и минимальным было количество эритроцитов в виде спущенного мяча. Число дегенеративных эритроцитов у крыс SHR было значительно больше, чем у крыс Вистар.

При курсовом введении ЭЛС крысам с артериальной гипертензией наблюда­лось повышение количества общих липидов и общих фосфолипидов. Соотноше­ние холестерин/фосфолипиды было достоверно ниже, чем у животных контроль­ной группы и не отличалось от значений у крыс линии Вистар. Количество ФЭА, ФХ и ФС у крыс, получавших ЭЛС, достоверно не отличалось от значений у кон­трольных животных. Содержание СМ было выше, чем в контрольной группе и не *

отличается от значений у крыс Вистар. Количество ЛФЛ под влиянием ЭЛС зна­чимо не изменялось. Процентное соотношение массовых долей различных фос- фолипидных фракций у животных, получавших ЭЛС, статистически значимо не отличалось от аналогичных показателей в контрольной группе. Использование ЭЛС у крыс линии SHR приводило к частичному восстановлению процентного содержания фосфолипидов наружного слоя мембраны – СМ и ФХ. Данные изме­нения липидного состава мембран эритроцитов под действием ЭЛС привели к улучшению показателей морфологии эритроцитов крыс с артериальной гипертен­зией.

У крыс с артериальной гипертензией, получавших ЭЛС содержание дискоци­тов в периферической крови было достоверно выше, чем в контрольной группе и не отличается от значений у крыс Вистар. Количество переходных форм в опыт­ной группе было достоверно ниже значений как в контрольной группе, так и в группе у крыс Вистар. Следует отметить, что у животных, получавших ЭЛС, дис- коциты в виде эллипсов или отсутствовали или наблюдались в единичных случа­ях. Количество клеток в виде плоского диска, дискоцитов с выростом и дискоци­тов с множественными выростами было достоверно ниже, чем в контроле. Среди эритроцитов предгемолитической формы количество куполообразных, по сравне­нию с контролем, статистически значимо не изменилось, а доля клеток сфериче­ской формы и в виде спущенного мяча достоверно снизилась. Однако общее ко­личество предгемолитических форм значимо не различалось в контрольной и опытной группах. Использование экстракта препятствовало росту числа эритро­цитов дегенеративной формы, их доля в опытной группе была гораздо ниже, чем в контроле.

Таким образом, курсовое применение ЭЛС у спонтанно-гипертензивных крыс препятствовало накоплению в кровеносном русле предгемолитических и де­генеративных форм эритроцитов, а также оказывало положительное воздействие на липидный состав мембран красных клеток.

При курсовом введении ЭЛХ крысам с артериальной гипертензией количест­во общих липидов статистически значимо не отличалось от контрольных значе­ний, а общее количество фосфолипидов достоверно возрастало по сравнению с контролем. Соотношение холестерин/фосфолипиды было значимо ниже, чем у животных контрольной группы и не отличалось от значений крыс Вистар. Коли­чество ФЭА, ФС и СМ у крыс, получавших ЭЛХ, достоверно не отличалось от значений у контрольных животных. Содержание ФХ было статистически значимо выше, чем в контрольной группе. При курсовом введении ЭЛХ у гипертензивных животных наблюдалось достоверное снижение количества ЛФЛ. Процентное со­отношение массовых долей ФЭА и СМ в мембранах эритроцитов крыс контроль­ной и опытной групп не различалось. У крыс, получавших исследуемый экстракт, возрастала, по сравнению с контрольными животными, относительная доля ФХ и снижалась в два раза доля ЛФЛ, причем процент ЛФЛ у леченных животных ли­нии SUR не различался со значениями интактных животных. Курсовое примене­ние ЭЛХ способствовало восстановлению процентного содержания ФХ – компо­нента наружного слоя мембраны эритроцита. Положительные изменения липид- ного состава мембран эритроцитов под действием ЭЛХ привели к улучшению по­казателей морфологии эритроцитов крыс с артериальной гипертензией.

При курсовом введении ЭЛХ количество дискоцитов у животных линии SHR достоверно возрастало по сравнению с контрольной группой. Среди эритроцитов с переходной формой доля клеток в виде эллипса, плоского диска и дискоцитов с выростом была достоверно ниже, чем в контроле и не отличалась от значений у нормотензивных крыс; количество дискоцитов с множественными выростами возросло; число дискоцитов с гребнем и эритроцитов в виде тутовой ягоды досто­верно не различалось ни с контролем, ни с крысами Вистар. Общее количество эритроцитов с переходной формой было статистически значимо выше, чем в кон­троле. Под действием ЭЛХ не изменялось содержание предгемолитических и де­генеративно измененных форм эритроцитов.

Анализируя полученные результаты, можно заключить, что ЭЭСР при курсо­вом введении крысам с артериальной гипертензией повышают содержание липи- дов в эритроцитарных мембранах, нормализуют фосфолипидный спектр и спо­собствуют снижению в периферической крови содержания предгемолитических и дегенеративных форм эритроцитов, с одновременным повышением числа крас­ных клеток дискоидной формы. По способности нормализовывать фосфолипид­ный спектр и улучшать показатели поверхносной архитектоники эритроцитов крыс SHR ЭЛС превосходит ЭЛХ.

В условиях стрептозотоцин-индуцированного диабета наблюдалось досто­верное снижение содержания общих липидов и общих фосфолипидов в мембра­нах эритроцитов. У крыс со стрептозотоцин-индуцированным диабетом на фоне снижения общего количества фосфолипидов отмечено также снижение и абсо­лютного содержания холестерина, однако соотношение холестерин/фосфолипиды достоверно не отличалось от значений интактных животных. У крыс со стрепто- зотоцин-индуцированным диабетом происходило снижение всего спектра фосфо­липидов в мембранах эритроцитов, однако максимальным было снижение, по сравнению с интактными значениями, содержания ФХ и ФС. В эритроцитарных мембранах крыс со стрептозотоцин-индуцированным диабетом значительно уве­личивалось содержание фракции лизофосфолипидов. При стрептозотоцин- индуцированном диабете произошло изменение соотношения мембранных фос­фолипидов – значительно снизилось процентное содержание ФЭА и ФС. Сущест­венно увеличилось, по сравнению с интактными значениями, относительное со­держание ЛФЛ. На модели стрептозотоцин-индуцированного диабета произошло изменение соотношений фосфолипидов наружного и внутреннего слоя мембран эритроцитов. Так, происходило снижение процентного содержания фосфолипи­дов внутреннего слоя мембраны – ФЭА и ФС; в наружном слое – снизилось про­центное содержание ФХ, с одновременным повышением доли СМ.

Курсовое применение ЭЛС привело к значительному возрастанию общего содержания фосфолипидов, при этом уровень общих липидов у животных со стрептозотоцин-индуцированным диабетом, получавших ЭЛС не отличался от значений интактных животных. Отношение холестерин/фосфолипиды в опытной группе было снижено, что свидетельствует о более выраженном восстановлении фосфолипидной компоненты мембран. Содержание ФС, ФХ и СМ увеличивалось при использовании ЭЛС в сравнении с контрольными значениями. Курсовое при­менение ЭЛС оказывало положительное влияние на соотношение различных фосфолипидов в мембранах эритроцитов. Так, повышалась процентная доля фос­фолипидов, составляющих внутренний слой биомембран – ФЭА и ФС. В резуль­тате соотношение фосфолипидов внутреннего и наружного слоев мембраны эрит­роцитов восстанавливалось до значений близких у интактных животных. Важным компонентом действия ЭЛС при стрептозотоцин-индуцированном диабете явля­ется снижение содержания ЛФЛ.

Под действием ЭЛХ возросло содержание общих липидов и общих фосфолипидов у крыс со стрептозотоцин-индуцированным диабетом. Уровень холесте­рина у животных со стрептозотоциновым диабетом, получавших ЭЛХ не отли­чался от контрольных значений. Отношение холестерин/фосфолипиды было сни­жено в опытной группе в сравнении с контрольными значениями. Содержание ФЭА при курсовом применении ЭЛХ при стрептозотоцин-индуцированном диа­бете достоверно превосходило значение этого показателя в контроле и не отличалось от данных в интактной группе. Увеличивалось содержание ФС и СМ при ис­пользовании ЭЛХ в сравнении с контрольными значениями. Несмотря на то, что абсолютные значения содержания лизофосфолипидов были выше в группе жи­вотных, получавших ЭЛХ, в процентном соотношении их содержание было дос­товерно снижено в сравнении с контролем. Курсовое применение ЭЛХ оказывало положительное влияние на соотношение различных фосфолипидов в мембранах эритроцитов. Так, повышалась процентная доля фосфолипидов, составляющих внутренний слой биомембран – ФЭА и ФС. В результате соотношение фосфоли­пидов внутреннего и наружного слоем мембраны эритроцитов восстанавливалось до значений близких у интактных животных.

Таким образом, в условиях моделей сердечно-сосудистой патологии и сахар­ного диабета ЭЭСР препятствуют снижению содержания общих липидов, общих фосфолипидов и предотвращают накопление холестерина и лизофосфолипидов. Курсовое применение ЭЭСР на моделях сердечно-сосудистых расстройств и са­харного диабета способствует восстановлению соотношения компонентов фосфо­липидов внутреннего и наружного слоя мембран эритроцитов. Указанные поло­жительные эффекты исследуемых экстрактов в отношении липидного спектра мембран эритроцитов находят свое отражение в восстановлении параметров по­верхностной архитектоники красных клеток, что проявляется снижением доли переходных, предгемолитических и дегенеративных форм и возрастанием количест­ва дискоцитов.

Активность многих ферментов в эритроцитах зависит от определенного со­отношения различных фосфолипидов в мембране. Большое значение в поддержа­нии морфо-функциональных свойств эритроцитов принадлежит активности мем- бранносвязаных ферментов Na/K-АТФазы и Mg/Ca-АТФазы [Теннис Р., 1997].

Между содержанием ФХ в мембране и активностью Na/K-АТФазы обнаружена положительная взаимосвязь [Черницкий Е.А., Воробей A.B., 1981; Геннис Р., 1997]. ЭЭСР способствуют восстановлению концентрации ФХ в мембране, что может приводить к восстановлению активности мембрано-связанных ферментов, восстанавливать ионный гомеостаз эритроцитов. Накопление ЛФЛ в мембране приводит к ингибированию активности мембраносвязанных ферментов. Сниже­ние активности Mg/Са-АТФазы приводит к повышению содержания внутрикле­точного содержания ионов Са²⁺ и запускает целый комплекс процессов, приводя­щих к нарушению морфофункционального состояния эритроцитов. ЭЭСР снижа­ют концентрацию ЛФЛ в условиях моделей сердечно-сосудистых расстройств, восстанавливая тем самым активность ферментов, обеспечивающих ионный го­меостаз и стабильность клетки в целом. Положительное влияние ЭЭСР на липид- ный состав мембран эритроцитов, в значительной степени может быть связано с присутствием у этих экстрактов антиокислительной активности [Плотников М.Б. и др., 1998]. Флавоноиды обладают способностью снижать активность фосфоли- пазы А₂ и фосфолипазы С [Gschwendt М. et al., 1983]. Вероятно, одним из путей повышения уровня фосфолипидов в группе леченных животных может являться ингибирующее влияние на фосфолипазы флавоноидов, входящих в ЭЭСР. На­блюдаемые изменения липидного спектра эритроцитов позволяют охарактеризо­вать действие ЭЭСР как мембраностабилизирующее.

Таким образом, универсальность гемореологического действия ЭЭСР в усло­виях моделей СПВК различной этиологии заключается в улучшении структурно- метаболических свойств эритроцитов.

Системы гемореологии и гемостаза при состояниях, сопровождающихся СПВК кардинальным образом включаются в формирование и прогрессирование многйх сердечно-сосудистых заболеваний (инфаркт миокарда, ишемия головного мозга, артериальная гипертензия), эндокринных расстройств (диабет), а также при различных вариантах экстремальных воздействий (истощающая физическая на­грузка). Следствием дизрегуляции в системах гемореологии и гемостаза является нарушение доставки кислорода к тканям. Возникающие очаги ишемии в пора­женных органах, в свою очередь, оказывают дополнительное воздействие на ос­новные гемореологические детерминанты, усиливая гемостатическую активацию в региональной и общей системах кровообращения. Патогенез расстройств, со­провождающихся СГТВК в данном случае можно рассмотреть в виде следующих этапов: 1) нарушения взаиморегулирующих отношений между системами гемо- реологии и гемостаза; 2) развитие адаптивных (компенсаторных) реакций; 3) ис­тощение компенсаторных возможностей; 4) становление новых взаимосвязей ме­жду компонентами систем гемореологии и гемостаза на качественно другом уровне [Танашян М.М., 2007]. Очевидно, что этот новый уровень будет характе­ризоваться меньшими потенциальными возможностями и недостаточным защит­ным резервом при воздействии повреждающих факторов. Последовательность и взаимозависимость структурно-функциональных изменений, с одной стороны, адаптационно-компенсаторных, с другой – деструктивных реакций, наличие или отсутствие между ними необходимого баланса – все это характеризует нарушения в системах гемореологии и гемостаза как ключевые в развитии и клиническом проявлении многих заболеваний, сопровождающихся СПВК.

Существование универсальных изменений в системах гемореологии и гемо­стаза при заболеваниях, сопровождающихся СПВК свидетельствует о принципи­альной возможности их фармакологической коррекции с помощью ЭЭСР, как средств полифункционального действия.

ЭЭСР проявили выраженную активность в отношении показателей геморео­логии и гемостаза в условиях различных моделей СПВК. Характер действия ЭЭСР на моделях СПВК определяется формированием новых взаимосвязей пока­зателей как внутри систем гемореологии и гемостаза, так и между ними. Актив­ность ЭЭСР в отношении систем гемореологии и гемостаза позволяет говорить о превалировании адаптационно-компенсаторных механизмов над деструктивными, усилении процессов взаиморегуляции и повышении стабильности этих систем, позволяющие поддерживать жидкое состояние крови и обеспечивать необходи­мый уровень кровоснабжения и оксигенации. При сердечно-сосудистой патоло­гии активация адаптационно-компенсаторных механизмов под действием ЭЭСР находит подтверждение в улучшении функционирования органов, что проявляет­ся в нормализации параметров ЭКГ и сокращении зоны некроза при инфаркте миокарда; восстановлении функциональной активности коры головного мозга при его ишемии (по данным ЭЭГ).

Применение ЭЭСР при сахарном диабете повышает взаимосвязь и согласо­ванность системы реологии крови и системы регуляции содержания глюкозы в крови. При сахарном диабете наблюдается ухудшение гемореологического стату­са, нарушение микрогемоциркуляции и оксигенации тканей. Одновременно с этим, снижается интенсивность вовлечения ‘глюкозы в метаболизм, что приводит к гипергликемии. Гипергликемия, как отражение комплекса метаболических на­рушений способна еще более усугубить состояние реологии крови за счет актива­ции процессов пероксидации и неферментативного гликозилирования белков мембран эритроцитов, от состояния которых в значительной степени зависят мик­рореологические свойства крови. Таким образом, сахарный диабет характеризует­ся разобщением функционирования системы реологии крови и метаболических процессов, что приводит, с одной стороны к нарушению микрогемоциркуляции и оксигенации, с другой – к возникновению энергетического дефицита. Улучшение гемореологических параметров под действием ЭЭСР у крыс с сахарным диабетом способствует нормализации микрогемоциркуляции и оксигенации тканей, одно­временно с этим ЭЭСР активируют процессы вовлечения глюкозы в метаболизм и препятствуют росту ее концентрации в крови. Таким образом, под действием ЭЭСР улучшение гемореологического статуса и оптимизация метаболических процессов при сахарном диабете находятся в тесной взаимосвязи, повышают вза- иморегулирующее влияние и стабильность этих систем.

Весьма показательным является проявление фармакологической активности ЭЭСР на модели наследственного гипоталамического несахарного диабета. Кры­сы с НГНД (линия ВгаШеЬого) характеризуются отсутствием взаимосвязи процес­сов регуляции и согласованности элементов функциональной системы реологии крови, что свидетельствует о предельном случае состояния дизрегуляции, при ко­тором адаптация затруднена и ведущими становятся деструктивные процессы.

Состояние дизрегуляции проявляется в нарушении реологических свойств крови и, что самое главное – в нарушении процессов микрогемоциркуляции и оксигена- ции. ЭЭСР не только улучшают гемореологический статус в целом, но и повыша­ет степень взаимосвязи между отдельными гемореологическими параметрами, исходно разобщенными в результате генетически детерминированной патологии. Таким образом, наблюдается восстановление регуляторных механизмов и повы­шение адаптационных возможностей у крыс с НГНД под влиянием ЭЭСР.

Важным свойством ЭЭСР является нормализация параметров гемореологии, гемостаза и показателей углеводного обмена в условиях модели истощающей фи­зической нагрузки. При истощающей физической нагрузке у крыс наблюдается нарушение реологических свойств крови, повышение гемостатического потен­циала и сдвиг углеводного обмена в сторону анаэробного метаболизма. Таким об­разом, истощающая физическая нагрузка характеризуется разобщением элемен­тов функциональных систем: реологии крови, гемостаза и углеводного метабо­лизма, что приводит к нарушению кислородтранспортной функции крови, сниже­нию производства энергии в организме. Применение ЭЭСР при истощающей фи­зической нагрузке способствует восстановлению гемореологических параметров, однако согласованность вышеперечисленных функциональных систем проявляет­ся слабо и выражается в умеренном повышении кислородтранспортной функции крови при отсутствии влияния исследуемых экстрактов на показатели работоспо­собности. Иная картина наблюдается при использовании ЭЭСР в условиях модели истощающей физической нагрузки у крыс с предварительным тренировочным пе­риодом, при котором улучшение гемореологического статуса сочетается с поло­жительными сдвигами углеводного обмена, улучшением доставки кислорода к тканям и ростом показателей физической работоспособности. Повышение толе­рантности к физической нагрузке под действием ЭЭСР в значительной степени проявилось в условиях модели инфаркта миокарда. Сочетание курсового приме­нения ЭЭСР и дозированной физической нагрузки у крыс с инфарктом миокарда способствует улучшению гемореологических параметров^ показателей углеводно­го обмена и увеличением индекса доставки кислорода к тканям.

По нашему мнению, универсальным механизмом проявления полифункцио­нальной активности ЭЭСР является их положительное воздействие на липидный состав мембран эритроцитов.

В условиях моделей сердечно-сосудистых расстройств, диабета, экстремаль­ных нагрузок нормализующий эффект ЭЭСР на структурно-функциональное со­стояние эритроцитов, помимо участия непосредственно в реологических меха­низмах, определяет также взаимосвязи между отдельными элементами функцио­нальных систем, обеспечивающих процессы микрогемоциркуляции и оксигенации тканей: гемореологии, гемостаза и метаболизма. Положительное воздействие ЭЭСР на липидный спектр мембран эритроцитов служит основой для восстанов­ления физико-химических свойств и структурной организация мембраны красных кровяных клеток. В результате применения ЭЭСР в условиях моделей СПВК, в эритроцитарной мембране увеличивается содержание общих липидов, нормали­зуется количество и соотношение фосфолипидов, представляющих наружный (фосфатидилхолин, сфингомиелин) и внутренний (фосфатидилсерин, фосфатиди- лэтаноламин) слои мембраны. Под действием ЭЭСР происходит снижение коли­чества лизофосфолипидов в мембране. Вышеперечисленные положительныесдвиги структурной организации мембраны эритроцитов под действием ЭЭСР за­кономерно должны отражаться на функциональных свойствах мембраны: восста­новление активности мембранассоциированных ферментов, регулирующих ион­ный гомеостаз красных клеток; повышение антиоксидантного потенциала мем­браны; снижение микровязкости мембраны, при сохранении ее механической прочности. Восстановление структурно-функциональных свойств мембраны эритроцитов под действием ЭЭСР определенным образом обеспечивает микро­реологические параметры – деформируемость и агрегацию эритроцитов, которые в свою очередь являются основными детерминатами процессов кровоснабжения и оксигенации в области микроциркуляторного русла.

Гемореологические нарушения при различных заболеваниях часто имеют схожую картину, в связи с этим синдром повышенной вязкости крови может рас­сматриваться как универсальный компонент в патогенезе многих заболеваний.

Основываясь на полученных результатах можно сделать вывод, что экстракты эк- дистероидсодержащих растений, обладающие активностью в отношении систем гемореологии, гемостаза и метаболизма, реализующие свои эффекты за счет вли­яния на структурно-функциональные свойства клеток, являются перспективными источниками для создания лекарственных препаратов различных фармакологиче­ских групп.

Диссертация Васильева А.С. “Фармакологические эффекты экстрактов экдистероидсодержащих растений в условиях моделей синдрома повышенной вязкости крови”. Содержание.

Диссертация Васильева А.С. “Фармакологические эффекты экстрактов экдистероидсодержащих растений в условиях моделей синдрома повышенной вязкости крови”. Введение.1.

Диссертация Васильева А.С. “Фармакологические эффекты экстрактов экдистероидсодержащих растений в условиях моделей синдрома повышенной вязкости крови”. 2.

Диссертация Васильева А.С. “Фармакологические эффекты экстрактов экдистероидсодержащих растений в условиях моделей синдрома повышенной вязкости крови”. 3.

Диссертация Васильева А.С. “Фармакологические эффекты экстрактов экдистероидсодержащих растений в условиях моделей синдрома повышенной вязкости крови”. 4.1, 4.2, 4.3.

Диссертация Васильева А.С. “Фармакологические эффекты экстрактов экдистероидсодержащих растений в условиях моделей синдрома повышенной вязкости крови”. 4.4.

Диссертация Васильева А.С. “Фармакологические эффекты экстрактов экдистероидсодержащих растений в условиях моделей синдрома повышенной вязкости крови”. 4.5.

Диссертация Васильева А.С. “Фармакологические эффекты экстрактов экдистероидсодержащих растений в условиях моделей синдрома повышенной вязкости крови”. 4.6.

Диссертация Васильева А.С. “Фармакологические эффекты экстрактов экдистероидсодержащих растений в условиях моделей синдрома повышенной вязкости крови”. 5.

Диссертация Васильева А.С. “Фармакологические эффекты экстрактов экдистероидсодержащих растений в условиях моделей синдрома повышенной вязкости крови”. Выводы

Диссертация Васильева А.С. “Фармакологические эффекты экстрактов экдистероидсодержащих растений в условиях моделей синдрома повышенной вязкости крови”. Список литературы