ГОСУДАРСТВЕННОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ
ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ
СИБИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ
Автор:
ФЕДИНА ОЛЕСЯ АЛЕКСАНДРОВНА
Диссертация
«ВЛИЯНИЕ ЭКСТРАКТОВ ЛЕВЗЕИ САФЛОРОВИДНОЙ
И ЛИХНИСА ХАЛЬЦЕДОНСКОГО НА ПОКАЗАТЕЛИ СИСТЕМЫ
ГЕМОСТАЗА В УСЛОВИЯХ РАЗЛИЧНЫХ МОДЕЛЕЙ
ГИПЕРКОАГУЛЯЦИОННОГО СИНДРОМА У КРЫС»
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Эксперименты проведены на 150 крысах-самцах Вистар, 54 спонтанно гипертензивных крысах-самцах (spontaneously hypertensive rats – SHR) массой 200-250 г. Животные получены из научно-исследовательской лаборатории экспериментального биомоделирования НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН (сертификат имеется).
Животные находились в стандартных условиях вивария на обычном пищевом рационе и свободном доступе к воде и пище. Контрольные и опытные животные находились в аналогичных условиях и имели одинаковую исходную среднюю массу, контролируемую ежедневным взвешиванием для коррекции вводимой дозы экстрактов. Эвтаназию производили, соблюдая “Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных”, утвержденные Министерством Здравоохранения России, путем дислокации шейного отдела позвонка под эфирным наркозом.
В работе использовали сухие экстракты лихниса хальцедонского и лев- зеи сафлоровидной, полученные экстрагированием 40% этиловым спиртом: экстракт лихниса – в лаборатории фитохимии Сибирского ботанического сада при Томском государственном университете, экстракт левзеи – на ОАО “Алтайвитамины”. Экстракты стандартизовали по содержанию экдистерона: в экстракте левзеи – 2,7%, в экстракте лихниса – 0,74 %.
Животным с моделями ишемии мозга и инфарктом миокарда исследуемые экстракты в дозах 150 мг/кг вводили ежедневно внутрижелудочно в виде взвеси в 1% крахмальной слизи в течение 5 суток после создания моделей, спонтанно гипертензивным крысам – в течение 14 суток. Контрольные животные получали эквиобъемное количество 1% крахмальной слизи.
Модель ишемии мозга воспроизводили под эфирным наркозом у крыс Вистар путем лигирования левой сонной артерии и ограничения кровотока по правой сонной артерии до 50 % от исходного уровня. [100]. Интенсивность кровотока через правую сонную артерию измеряли с помощью электромагнитного расходометра крови MFV-1100 (Nihon Kohden, Japan).
Инфаркт миокарда воспроизводили на крысах Вистар под эфирным наркозом путем полной перевязки нисходящей коронарной артерии на границе ее верхней и средней трети [91]. Верификацию инфаркта осуществляли с помощью электрокардиографа по характерным признакам на электрокардиограмме (ЭКГ): учитывали качественные изменения комплекса QRS, т.е. исчезновение зубца R, появление комплекса типа QS, подъем сегмента ST выше изолинии [131]. После операции животным с моделями ишемии проводили антибиотикотерапию (ампицилин-натрий в/м) и антисептическую обработку раневых поверхностей. Все показатели гемостаза исследовали у животных на 5-е сутки после создания моделей.
В качестве модели артериальной гипертензии использовали линию спонтанно гипертензивных крыс (SHR). Изучаемые параметры оценивали на 14 сутки с момента начала введения экстрактов экдистероидсодержащих растений.
Для исследования влияния экстрактов лихниса и левзеи на тромбоци- тарные и гемокоагуляционные параметры у крыс при истощающей физической нагрузке использовали бег на тредбане [20]. Скорость беговой дорожки – 22 м/мин. Крысы выполняли нагрузку бегом до отказа от выполнения работы. Животным вводили экстракты экдистероидсодержащих растений левзеи и лихниса в дозе 150 мг/кг внутрижелудочно в виде взвеси в 1% крахмальной слизи в течение 14 дней. Контрольные животные получали эквиобъемное количество 1% крахмальной слизи.
Изучали следующие гемостазиологические показатели: агрегацию тромбоцитов, активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ), протромбиновое время, а также коагулографические показатели.
Для оценки агрегации тромбоцитов применялся метод Born G. V. R. (1962), суть которого заключается в том, что при добавлении проагрегантов в плазме происходит изменение ее оптической плотности за счет укрупнения частиц и увеличения свободных пространств [161]. Использовали плазму крови, стабилизированную 3,8 % раствором цитрата натрия в соотношении 1:9. Центрифугированием крови при 800 об/мин в течение 10 мин получали богатую тромбоцитами плазму, а при 3000 об/мин в течение 20 мин – бедную тромбоцитами плазму. В качестве индуктора агрегации использовали АДФ, в конечной концентрации 4×10′5 М. Агрегатограммы записывали на агрегомет- ре с регистратором типа Н-392. На агрегатограмме определяли максимальное изменение оптической плотности богатой тромбоцитами плазмы (амплитуду агрегации в %) после добавления АДФ.
Для изучения антиагрегантной активности сосудистой стенки у крыс под эфирным наркозом выделяли сегмент брюшной аорты. В течение 3 мин проводили инкубацию сосудистого сегмента (массой 4-5 мг) интактных крыс линии 81Ж (контроль II) и сегментов сосудов крыс опытных групп, предварительно получавших в течение 14 дней экстракте левзеи и лихниса, с последующей регистрацией АДФ-индуцированной агрегацией тромбоцитов. Полученные результаты сравнивали с данными агрегации тромбоцитов в плазме спонтанно гипертензивных крыс без предварительной инкубации с сегментом сосуда (контроль I).
Для оценки спектра антиагрегантной активности исследуемых экстрактов использовали индукторы агрегации: АДФ (4×10″5 М), коллаген (50 мкг/мл), тромбин (0,3 ЕД/мл), арахидоновую кислоту (3,3><10″7М).
Исследуемые экстракты вносили в пробу за 15 мин до агрегации в объеме 10 мкл в конечной концентрации 1хЮ”5 г/мл.
Коагулограммы регистрировали на коагулографе Н334 [72]. Принцип метода основан на измерении электросопротивляемости крови, залитой в кювету с двумя электродами. Кювета совершает колебательные движения, благодаря чему кровь попеременно замыкает и размыкает электроды. При помощи самопишущего устройства этот процесс отражается на движущейся диаграммой ленте. По коагулограмме определяли следующие показатели:
- Т1 — начало свертывания (сек). Время от начала исследования до первого колебания с уменьшенной амплитудой.
- Т2 – продолжительность свертывания (сек). Время от первого колебания с уменьшенной амплитудой до первого колебания с минимальной амплитудой,
- Тз — конец свертывания (сек). Время от начала исследования до первого колебания с минимальной амплитудой.
АЧТВ определяли на коагулометре KG-4 с использованием стандартных реактивов фирмы Cormay.
Протромбиновое время определяли методом Квика на коатулометре KG- 4 с использованием стандартных реактивов фирмы Cormay.
Формирование фибринового сгустка в плазме крови под действием экзогенного тромбина изучали турбидиметрическим методом [152]. Принцип метода основан на регистрации изменения оптических свойств инкубационной среды при образовании фибринового сгустка. Динамика светопоглащения позволяет оценивать скорость и продолжительность процесса полимеризации фибрина в плазме крови. Использовали цитратную плазму крыс-самцов Вис- тар с моделью ишемии мозга. Процесс гемокоагуляции инициировали добавлением бычьего тромбина (2 мг/мл). Исследуемые экстракты вносили в пробы за 15 мин до агрегации в объеме 10 мкл в конечной концентрации 1><10-3 г/мл. Регистрацию светопоглащения инкубационной среды проводили на спектрофотометре Hitachi при длине волны 340 нм.
Статистическую обработку результатов производили с использованием пакета статистических программ Statistica for Windows 4.3. Внутри групп определяли среднее значение, ошибку среднего значения. Межгрупповые различия оценивали с использованием t – критерия Стьюдента или непараметрического критерия Вилкоксона-Манна-Уитни.
Содержание:
- Диссертация О.А. Федина “Влияние экстрактов левзеи сафлоровидной и лихниса хальцедонского на показатели системы гемостаза в условиях различных моделей гиперкоагуляционного синдрома у крыс”. Оглавление
- Диссертация О.А. Федина “Влияние экстрактов левзеи сафлоровидной и лихниса хальцедонского на показатели системы гемостаза в условиях различных моделей гиперкоагуляционного синдрома у крыс”. Введение
- Диссертация О.А. Федина “Влияние экстрактов левзеи сафлоровидной и лихниса хальцедонского на показатели системы гемостаза в условиях различных моделей гиперкоагуляционного синдрома у крыс”. Глава I
- Диссертация О.А. Федина “Влияние экстрактов левзеи сафлоровидной и лихниса хальцедонского на показатели системы гемостаза в условиях различных моделей гиперкоагуляционного синдрома у крыс”. Глава II
- Диссертация О.А. Федина “Влияние экстрактов левзеи сафлоровидной и лихниса хальцедонского на показатели системы гемостаза в условиях различных моделей гиперкоагуляционного синдрома у крыс”. Глава III
- Диссертация О.А. Федина “Влияние экстрактов левзеи сафлоровидной и лихниса хальцедонского на показатели системы гемостаза в условиях различных моделей гиперкоагуляционного синдрома у крыс”. Заключение
- Диссертация О.А. Федина “Влияние экстрактов левзеи сафлоровидной и лихниса хальцедонского на показатели системы гемостаза в условиях различных моделей гиперкоагуляционного синдрома у крыс”. Выводы
«Леветон Форте» помогает улучшить спортивные результаты даже мастерам спорта международного класса.
Сочетание натуральных компонентов в легко усваиваемой организмом форме даёт длительный заряд бодрости и энергии, необходимых при тяжёлых физических нагрузках. Не являясь допинговым средством, «Леветон Форте» обладает мощным анаболическим эффектом, способствующим росту мышечной массы, силы и выносливости.
