Министерство здравоохранения РФ
Рязанский государственный медицинский
университет имени академика И.П.Павлова
Автор:
БУРМИСТРОВА ЛИЛИЯ АЛЕКСАНДРОВНА
Диссертация
«ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ И БИОХИМИЧЕСКАЯ
ОЦЕНКА БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ
ТРУТНЕВОГО РАСПЛОДА»
Содержание
Глава 3.
Часть 3.
3.3.
Сравнительная оценка особенностей
течения посткастрационного
периода у крыс-самцов при назначении
трутневого расплода и маточного молочка
Специфика биологического происхождения трутневого расплода определила выбор в качестве одной из характеристик комплексной оценки биологической активности его влияние на показатели течения посткастрационного периода у половозрелых крыс-самцов, подвергнутых односторонней кастрации.
Комплекс показателей, характеризующих выраженность гонадотропного эффекта исследуемого продукта – трутневого расплода и средства сравнения – маточного молочка, включал:
– показатели прямой массаметрии: масса тела, семенника, семенных пузырьков, предстательной железы;
– величины весовых коэффициентов для семенников, семенных пузырьков и предстательной железы, отражающих сопряженность органных изменений и массы тела после воздействия анализируемых факторов;
– показатели динамики концентрации основного гормона, синтезирующегося в яичках – тестостерона;
– значения концентрации фруктозы в семенной жидкости, отражающие андрогенсинтетическую функцию семенников.
3.3.1.
Изменения концентраций тестостерона в сыворотке крови у крыс
после односторонней кастрации
и на фоне введения трутневого
расплода и маточного молочка
Уровень тестостерона у крыс контрольной серии оказался равным 2,806 + 0,502 нмоль/л. На 5-й день после односторонней кастрации его концентрация упала до 0,245 + 0,029 нмоль/л, то есть до 9% от контроля, что является убедительным подтверждением формирования выраженного гипогонадизма. В сериях, где кастрированные крысы получали в течение этих пяти дней маточное молочко и трутневый расплод, концентрация гормона также значительно уменьшилась («кастрация + ММ» – 0,691 + 0,186 нмоль/л; «кастрация + ТР» – 0,697 + 0,188 нмоль/л) в обоих случаях приблизительно на 75%, но это оказалось достоверно выше, чем у крыс, не получавших после тестэктомии биологически активные продукты пчеловодства, что может быть проявлением начала более активного восстановительного процесса в препаратных группах.
К 10-му дню в серии “кастрация” значения концентрации тестостерона также остались на довольно низком уровне по сравнению с контрольным пара-метром (0,488 + 0,054 нмоль/л, или 17%), хотя и проявилась тенденция к ее возрастанию. Принципиально иные данные отмечены у животных, получавших в течение 10 дней посткастрационного периода маточное молочко и трутневый расплод: уровень тестостерона возрос до 79% (2,214 + 0,480 нмоль/л) в серии “кастрация + ММ” и, еще в большей степени, до 107% (3,005 + 0,665 нмоль/л) – в серии “кастрация + ТР”. При этом в обеих препаратных сериях фиксируемый показатель уже статистически не отличался от контрольного значения и, как и на предыдущем этапе, достоверно превышал соответствующую величину серии “кастрация”, что опять-таки свидетельствует о наличии стимулирующего эффекта выработки тестостерона в случаях применения маточного молочка и трутневого расплода.
Наконец, на 15-й день эксперимента, у кастрированных крыс, не получавших продуктов пчеловодства, отмечено полное восстановление уровня тестостерона по сравнению с показателем биологического контроля – 2,894 + 0,721 нмоль/л, или 103%. У крыс на фоне введения маточного молочка (3,606 + 0,754 нмоль/л, или 129% от контроля) и трутневого расплода (3,719 + 1,315 нмоль/л, или 133%) эти показатели также не имели достоверных различий в сравнении с контролем (табл. 23, 24, рис.5).
Немаловажное значение имеет оценка влияния маточного молочка и трутневого расплода на уровень тестостерона у некастрированных, то есть интактных животных. Оказалось, что 15-дневное введение исследуемых продуктов пчеловодства не оказало заметного влияния на концентрацию тестостерона (ММ – 2,059 + 0,286 нмоль/л, ТР – 2,351 + 0,432 нмоль/л). Эти данные и отсутствие гипертестеронемии в сериях “кастрация + ММ” и “кастрация + ТР” позволяют с большой вероятностью исключить возможность периферического типа действия, то есть аналога заместительной терапии, за счет только андрогенов, входящих в состав маточного молочка и трутневого расплода и, наоборот, связать их гонадотропный эффект со стимуляцией центральных звеньев, контролирующих продукцию тестостерона.
Таблица 23. Концентрация тестостерона в сыворотке крови (нмоль/л) крыс группы биологического контроля; у интактных животных, получавших в течении 15 дней маточное молочко (ММ), трутневый расплод (ТР) и у крыс в различные сроки после односторонней кастрации
| Серии
Показатели |
Контроль | Интактные +
ММ, 15 дней |
Интактные +
ТР, 15 дней |
Кастрация,
5 дней |
Кастрация,
10 дней |
Кастрация,
15 дней |
| М + m | 2,806 + 0,502 | 2,059 + 0,286 | 2,351 + 0,432 | 0,245 + 0,029 | 0,488 + 0,054 | 2,894 + 0,721
|
| % контр. | 100,0 | 73,4 | 83,8 | 8,7 | 17,4 | 103,1 |
| Тконтр. | — | 1,29 | 0,69 | 5,09 | 4,59 | 0,10 |
| Рконтр. | — | >0,05 | >0,05 | <0,001 | <0,001 | >0,05
|
| %ММ | — | 100,0 | 114,2 | — | — | — |
| ТММ | — | — | 0,57 | — | — | — |
| РММ | — | — | >0,05 | — | — | — |
Примечание. В таблицах этого раздела приняты следующие сокращения: %контр., Тконтр., Рконтр.; %кастр., Ткастр., Ркасир.; %ММ, ТММ, РММ – параметры статистической обработки изменений (%, значение критерия Стьюдента и вероятности ошибочного прогноза) по сравнению с серией “контроль”, “кастрация” и “кастрация + ММ” (в двух последних – на соответствующие периоды сравнения).
Таблица 24. Концентрация тестостерона в сыворотке крови (нмоль/л) кастрированных крыс,
получавших в посткастрационном периоде маточное молочко (ММ) и трутневый расплод (ТР)
| Серии
Показатели |
Кастрация, 5 дней + ММ | Кастрация,
10 дней + ММ |
Кастрация,
15 дней + ММ |
Кастрация,
5 дней + ТР |
Кастрация,
10 дней + ТР |
Кастрация,
15 дней + ТР |
|
| М + m
|
0,691 + 0,186 | 2,214 + 0,480 | 3,606 + 0,754 | 0,697 + 0,665 | 3,719 + 1,315 | 3,719 + 1,1315 | |
| %контр. | 24,6 | 78,9 | 128,6 | 24,8 | 107,1 | 132,5 | |
| Тконтр. | 3,95 | 0,85 | 0,88 | 3,93 | 0,24 | 0,65 | |
| Рконтр.
|
<0,001 | >0,05 | >0,05 | <0,001 | >0,05 | >0,05 | |
| %кастр. | 282,0 | 453,7 | 124,6 | 284,5 | 615,8 | 128,5 | |
| Ткастр. | 2,37 | 3,42 | 0,68 | 2,38 | 3,77 | 0,55 | |
| Ркастр.
|
<0,05 | <0,01 | >0,05 | <0,05 | <0,01 | >0,05 | |
| %ММ | 100,0 | 100,0 | 100,0 | 100,9 | 135,7 | 103,1 | |
| ТММ | — | — | — | 0,02 | 0,97 | 0,08 | |
| РММ | — | — | — | >0,05 | >0,05 | >0,05 | |
Рис. 5. Изменения (в %) концентрации тестостерона в сыворотке крови крыс опытных серий
по сравнению с контролем (100%-ный уровень).
3.3.2.
Содержание фруктозы в семенной жидкости
крыс контрольной и
опытной серий в различные сроки
посткастрационного периода
Концентрация фруктозы в эякуляте и содержимом семенных пузырьков, как отмечено выше, позволяет судить об уровне андрогенной функции семенников. При этом информативность данного показателя имеет определенные достоинства, в частности отражает непосредственно состояние “места события”, в то время как концентрация тестостерона зависит не только от секреции его семенниками, но и от образования за счет периферического превращения из других андрогенов, в частности из андростендиона и дегидроэпиандростерона (Н.Т.Старкова, 1983).
У контрольных крыс содержание фруктозы в исследуемом биосубстрате составило 4,14 + 0,35 ммоль/л. Введение маточного молочка и трутневого расплода некастрированным животным пятнацатидневным курсом не повлияло на уровень определяемого метаболита (ММ – 5,34 + 0,79 ммоль/л, или 129% от контроля, ТР – 4,38 + 0,15 ммоль/л, или 120%). Это подтверждает отмеченное выше предположение об отсутствии гонадотропного эффекта у сравниваемых биологически активных продуктов пчеловодства в условиях нормотестостеронемии.
На 5-й день в серии “кастрация” (табл. 25, рис. 6) отмечено достоверное уменьшение концентрации фруктозы до 2,71 + 0,42 ммоль/л (66%), что вполне может быть связано с первичным дефицитом тестостерона, вызванным тестэктомией. В препаратных сериях уровень фруктозы колебался в пределах, не выходящих достоверно за контрольные рамки: “кастрация + ММ” – 7,08 + 2,01 ммоль/л, 171%; “кастрация + ТР” – 4,52 + 1,40 ммоль/л, 109%. Данное принципиальное различие с серией “кастрация” и, должно быть, отражает начавшуюся метаболическую активацию, направленную на восстановление половой функции у крыс, получавших маточное молочко и трутневый расплод.
Таблица 25. Концентрация фруктозы в семенной жидкости (ммоль/л) крыс в контрольной и опытной сериях
| Срок определения
Серии |
5-й день | 10-й день | 15-й день |
| Контроль
4,14 + 0,35 |
— |
— |
— |
| Интактные + ММ
%контр. Тконтр. Рконтр.
|
—
— — —
|
—
— — —
|
5,34 + 0,79
129,0 1,38 >0,05 |
| Интактные + ТР
%контр. Тконтр. Рконтр. |
—
— — —
|
—
— — —
|
4,38 + 1,15
120,3 0,70 >0,05 |
| Кастрация
%контр. Тконтр. Рконтр.
|
2,71 + 0,42
65,5 2,62 <0,05 |
10,10 + 3,73
244,0 1,59 >0,05 |
22,47 + 7,20
542,8 2,54 <0,05 |
| Кастрация + ММ
%контр. Тконтр. Рконтр. %кастр. Ткастр. Ркастр.
|
7,08 + 2,01
171,0 1,44 >0,05 261,3 2,13 <0,05 |
22,87 + 4,16
552,4 4,49 <0,001 226,4 2,29 <0,05 |
12,02 + 3,06
290,3 2,55 <0,05 53,5 1,42 >0,05 |
| Кастрация + ТР
%контр. Тконтр. Рконтр. %кастр. Ткастр. Ркастр. %ММ ТММ РММ |
4,52 + 1,40
109,2 0,26 >0,05 166,8 1,23 >0,05 63,9 1,05 >0,05 |
28,60 + 6,29
690,8 3,88 <0,01 283,2 2,53 <0,05 125,1 0,77 >0,05 |
8,95 + 2,10
216,2 2,26 <0,05 39,8 1,80 >0,05 74,4 0,83 >0,05 |
Рис. 6. Изменения (в %) концентрации фруктозы крыс опытных серий по сравнению с контролем
(100%-ный уровень).
Через 10 дней после односторонней кастрации содержание фруктозы у крыс с “чистой” экспериментальной патологией возросло до 244% (10,10 + 3,73 ммоль/л) от контроля, что, вероятнее всего, является одним из проявлений спонтанного восстановительного процесса. Его выраженность на данном этапе оказалась достоверно высокой на фоне ежедневного назначения как маточного молочка (22,87 + 4,16, или 552%), так и трутневого расплода (28,60 + 6,29 ммоль/л, или 691%), что опять-таки коррелирует с соответствующими различиями по значениям тестостерона крови на данном этапе эксперимента.
Иная картина представилась на 15-й день. В препаратных группах уровень фруктозы, хотя и продолжал существенно и достоверно превышать контрольный показатель (“кастрация + ММ” – 12,02 + 3,06 ммоль/л, или 290%; “каст-рация + ТР” – 8,95 + 2,10 ммоль/л, или 216%), имел четкую тенденцию “возвращения” к исходным, то есть контрольным, значениям, тогда как в серии “кастрация” только на этом этапе был достигнут максимальный уровень (22,47 + 7,20 ммоль/л, или 543%), идентичный 10-дневному значению при назначениях маточного молочка и трутневого расплода. Как видно, и здесь значительному увеличению концентрации фруктозы соответствует момент нормотестостеронемии. Стабилизация последней у крыс, получавших продукты пчеловодства сопровождалась отчетливой тенденцией восстановления, то есть снижением по сравнению с параметрами 10-го дня и концентрации фруктозы в содержимом семенных пузырьков.
Таким образом, анализ динамики биохимических параметров – тестостерона и фруктозы – свидетельствует о существенном ускорении восстановительного процесса у кастрированных животных, получавших в посткастрационном периоде маточное молочко и трутневый расплод. Причем, по абсолютным величинам большинства показателей действие применяемых биологически активных продуктов пчеловодства оказалось равновыраженным.
